[发明专利]血清型冻干粉25-羟基维生素D3和D2质量控制物质及其制备方法

权利要求书

1.一种血清型冻干粉25-羟基维生素D3和D2质量控制物质，其特征在于：该冻干粉质量控制物质为：以血清为基质按要求浓度加入25-羟基维生素D3、D2后再加入赋形剂、防腐剂，搅拌均匀后，进行低温预冻、冷冻干燥，制备成25-羟基维生素D3、D2质量控制物质的冻干粉：

所述的赋形剂包括但不限于冻干保护剂、填充剂、抗氧化剂、酸碱调节剂，各组分加入溶液后在混合物中的各自含量为：

25-羟基维生素D3 10～200ng/mL，

25-羟基维生素D2 0～200ng/mL，

冻干保护剂0.5％～15％，

填充剂为0.5％～15％，

抗氧化剂0.1～30mmol/L，

酸碱调节剂0.1～100mmol/L，

防腐剂0.01％～5％。

2.根据权利要求1所述的血清型冻干粉25-羟基维生素D3和D2质量控制物质的制备方法，其特征在于：步骤包括：

(1)搜集无病毒血清或从正常人体搜集来的、用柠檬酸盐和磷酸盐保护的混合血清在-20℃保存，并避免反复冻融；临用前先放2～8℃使其初步融化，然后室温下使之全部融化，完全解冻后混匀，依次用滤纸、0.45μm、0.22μm微孔滤膜进行过滤除去其中的杂质；

(2)在血清中添加沉淀剂或者沉淀剂与二价离子的混合物质进行沉淀、离心澄清处理获得基质血清；

(3)取步骤(2)中基质血清加入25-羟基维生素D3、25-羟基维生素D2的标准溶液制成特定浓度要求的血清基质25-羟基维生素D3、D2质量控制物质；

(4)取步骤(3)中制备的血清基质25-羟基维生素D3、D2质量控制物质，加入赋形剂、防腐剂等，搅拌均匀后进行低温预冻、冷冻干燥，制备成冻干粉。

3.根据权利要求2所述的血清型冻干粉25-羟基维生素D3和D2质量控制物质的制备方法，其特征在于：步骤(1)从正常人体搜集来的、用柠檬酸盐和磷酸盐保护的混合血清，使用前需将血清用5g/L～9g/L的NaCl溶液进行透析，和/或为了使血清pH值恢复到正常水平、使用碱性溶液将血清pH调至7.4～8.0。

4.根据权利要求2所述的血清型冻干粉25-羟基维生素D3和D2质量控制物质的制备方法，其特征在于：步骤(2)添加沉淀剂或者沉淀剂与二价离子的混合物质后，则放置30min～72h，然后温度在10～20℃经离心至少10min，将血清中产生的沉淀聚集在离心管底部，取上部澄清血清备用。

5.根据权利要求2所述的血清型冻干粉25-羟基维生素D3和D2质量控制物质的制备方法，其特征在于：步骤(2)所使用的沉淀剂为磷钨酸、硫酸葡聚糖、盐酸葡聚糖、肝素或PEG中的一种，其浓度为0～10g/L；所述的二价阳离子为Mg²⁺、Ca²⁺或Mn²⁺，其浓度在0～100mmol/L。

6.根据权利要求3所述的血清型冻干粉25-羟基维生素D3和D2质量控制物质的制备方法，其特征在于：

步骤(2)添加的为沉淀剂，则在加入后放置30min～72h，经离心至少10min，温度在10～20℃，将血清中产生的沉淀聚集在离心管底部，取上部澄清血清备用；

步骤(2)添加的为沉淀剂与二价阳离子混合，则经离心后的血清需进行透析或化学沉淀的方法再处理；

透析为将得到的基质血清于5～10g/L的NaCl、缓冲液中进行透析，直至其浓度降至正常浓度水平直接进入下一步处理即步骤(3)的处理步骤；

化学沉淀则是添加化学沉淀剂：碳酸钠、硫化钠、磷酸盐、草酸、氢氧化钠中的一种或多种的试剂溶液将多余的金属离子进行沉淀，混匀；然后放置30min～72h，经离心至少10min，温度在10～20℃，将产生的沉淀聚集在离心管底部，取上部血清备用。

7.根据权利要求3所述的血清型冻干粉25-羟基维生素D3和D2质量控制物质的制备方法，其特征在于：步骤(3)中的25-羟基维生素D3、25-羟基维生素D2的标准溶液先经氮气吹干除去有机溶剂后，再将基质血清加入，搅拌至少4小时。