[发明专利]血清型冻干粉25-羟基维生素D3和D2质量控制物质及其制备方法

说明书

一种血清型冻干粉25‑羟基维生素D3和D2质量控制物质及其制备方法，该冻干粉溶液状态时各组分加入溶液后在混合物中的各自含量为：25‑羟基维生素D3 10～200ng/mL，25‑羟基维生素D2 0～200ng/mL，冻干保护剂0.5％～15％，填充剂为0.5％～15％，抗氧化剂0.1～30mmol/L，酸碱调节剂0.1～100mmol/L，防腐剂0.01％～5％。该物质具有均匀性、稳定性好，不需要低温冷冻保存，而且其可用于25‑羟基维生素D3、D2的校准品，也可用于25‑羟基维生素D3、D2的质控品等的优点。

技术领域

本发明涉及25-羟基维生素D3和D2质量控制物质技术领域，具体的涉及一种均匀性好、稳定性好，不需要冷冻保存的血清型冻干粉25-羟基维生素D3和D2质量控制物质及其制备方法。

研究背景

维生素D(Vitamin D)是一种脂溶性维生素，为固醇类衍生物，主要生理功能是调节人体内钙、磷代谢，对促进钙的吸收、维持人体内钙浓度水平、促进和维持骨骼的正常生长和发育起重要作用。儿童缺乏维生素D会导致骨骼畸形，如出现佝偻病等；而成人缺乏维生素D会导致骨质疏松症。最近有研究证实，血清中较高浓度水平的维生素D可降低乳腺癌、结肠癌和前列腺癌的发病率；较低浓度水平的维生素D也可能是一个潜在的心血管疾病危险因素。

维生素D具有几个不同于其他维生素的特点：①它是一种类固醇，其作用类似于其它类固醇激素；②当皮肤等得到足够的阳光紫外线照射后，身体就可贮存一定量的维生素D；③仅有的可转换成激素型的维生素。

目前已知的维生素D至少有10种，其中最重要的是D2和D3两种，维生素D2又称麦角钙化醇、维生素D3又称胆钙化醇，二者不能相互转化。对绝大多数人来说，阳光照射形成维生素D是维生素D3的主要来源，而维生素D2主要存在于各种食物中。这两种维生素D经血液循环进入肝脏后经25-羟化酶催化转化为较稳定的25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3，总称25-羟基维生素D，然后在肝脏中进一步代谢形成具有生物学活性的1,25-双羟维生素D。人体内血液循环中的25-羟基维生素D和1,25-双羟维生素D大约有85％～88％与维生素D结合蛋白(vitamin D binding protein，DBP)结合，12％～15％与白蛋白结合，大约不到1％为游离形式。由于维生素D和1,25-双羟维生素D的半衰期相对较短(<2d)，因此，半衰期长、性质稳定的25-羟基维生素D被认为是评价体内维生素D水平的重要指标。人血液中25-羟基维生素D≤20ng/mL为缺乏，25-羟基维生素D在21～29ng/mL为相对不足，25-羟基维生素D≥30ng/mL为维生素D充足。按照此标准，国内有78％～98％的普通人群出现维生素D缺乏，其中有约30％严重不足。有研究者对5531例北京城区居民的维生素D含量水平进行研究，显示缺乏患病率高达87.1％，平均25-羟基维生素D水平仅为(12.3±7.5)ng/mL，远低于美国人(23～25)ng/mL和加拿大人的(25～31)ng/mL水平。

随着老年人年龄的增加维生素D水平不断降低，婴幼儿、儿童和适孕妇女中，人群维生素D水平亦不高，缺乏或不足所占比例达30％～98％。因此应该重视中国人群的维生素D状况。

目前市场上25-羟基维生素D试剂盒检测方法主要有酶联免疫法、荧光免疫层析法、胶体金免疫层析法、化学发光法、酶供体竞争法、克隆酶工体竞争法和液相色谱-串联质谱法等。维生素D的准确测定需要一个稳定质量控制物质来校准、监控仪器状态和试剂的好坏，虽然各种试剂盒均有配套的维生素D质控品，有冻干、液体等不同类型，而关于25-羟基维生素D3、D2质量控制物质的专利目前国内尚无相关的报道信息。

在临床检测维生素D中，由于检测样本为人血清，如果质量控制物质的基质与人血清相同或相似，就可以更好的监测实验方法的准确性和稳定性。虽然直接使用人血清作为质量控制物质用于维生素D的临床监测，但由于人血清为液体，临床实验室大多也缺少超低温保存装置，导致其不宜长久保存。目前市场上已有的25-羟基维生素D质控品，有些基质不是人血清，经加速(37.0℃)稳定性考察后稳定性也欠佳。