[发明专利]一种同时检测禽腺病毒I、II、III群多重荧光定量PCR试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种同时检测禽腺病毒I、II、III群多重荧光定量PCR引物组和探针组，所述引物组的核苷酸序列如下所示：

I-FADV-F：5’- GCGAGATYCCKCAGATG -3’（SEQ ID NO：1）；

I-FADV-R：5’- GGAGGYCKGTTCTCGAGC -3’（SEQ ID NO：2）；

II-FADV-F：5’- GCTGTTGTGCGATCTGAAG -3’（SEQ ID NO：4）；

II-FADV-R：5’- CATTGGAGGAGCAACGGTA -3’ （SEQ ID NO：5）；

III-FADV-F：5’- GTGGGTGATAACAGGATTGTG -3’，（SEQ ID NO：7）；

III-FADV-R：5’- CGCCAAAGGATTGTAAGCT -3’（SEQ ID NO：8）；

所述探针组的核苷酸序列为：

I-FADV-P： 5’ - CCTGGGTCAAACCGAACATGTASTC -3’（SEQ ID NO：3）；

II-FADV-P： 5’- TCAGCTTTATTAGAACCGCAAACGAG -3’（SEQ ID NO：6）；

III-FADV-P：5’-CTACTTCGACATCCAGGGCATCTTG -3’（SEQ ID NO：9）；

或者为所述序列的核苷酸互补序列；

所述探针组的序列两端分别标有荧光基团和淬灭基团，各探针序列之间标记的荧光基团不同。

2.一种同时检测禽腺病毒I、II、III群多重荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求1所述的引物组和探针组。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有PCR反应液、Taq酶液、阴性质控品、阳性质控品。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，PCR反应液含有200～300mM Tris、45～55mM KCl、23～27mM MgCl₂、0.02%～0.03%Trixon-X100、4.5～5.5%甘油、6～7mM dNTP。

5.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，Taq酶液由2.5U/μL热启动Taq酶、25mMTris、30%甘油、1mM DTT组成。

6.一种同时检测禽腺病毒I、II、III群多重荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）从样品中提取核酸；

2）以提取的核酸为模板，用权利要求1所述的引物组及探针组进行多重荧光定量PCR扩增反应并收集荧光信号；

3）根据荧光信号判定样品中是否含有禽腺病毒I、II、III群；

上述方法用于非疾病的诊断和治疗。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤2）中的多重荧光定量PCR扩增反应体系为：

PCR反应液 18μl

引物探针混合液 2μl

Taq酶液 1μl

核酸模板 4μl

总体积共25μl。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤2）中多重荧光定量PCR扩增反应程序为：93~95℃，3~10min；93~95℃ 15~35s，52~58℃ 35~60s，40个循环。