[发明专利]一种同时检测禽腺病毒I、II、III群多重荧光定量PCR试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种同时检测禽腺病毒I、II、III群多重荧光PCR试剂盒及检测方法。本发明分别设计了3对特异性引物和3条不同荧光标记的检测探针，实现在一个反应中同时对禽腺病毒I、II、III群进行快速、准确分群的检测。本发明的试剂盒各检测通道荧光信号及扩增效率互不干扰，而且检测灵敏度高特异性好，可用于禽腺病毒感染的疫情检测和防控。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及了一种同时检测禽腺病毒I、II、III群多重荧光PCR试剂盒及检测方法。

背景技术

禽腺病毒，双链DNA病毒，属于腺病毒科禽腺病毒属。根据群特异性抗原结构不同分为3个群：I群、II群、III群。I群主要是传统的禽腺病毒，有12个血清型，代表株是鸡胚致死性孤儿病毒(CELO)，具有共同的群特异性抗原。II群禽腺病毒包括火鸡出血性肠炎病毒(HEV)、大理石脾病毒和鸡大脾病毒，它们与I群禽腺病毒无抗原相关性。III群禽腺病毒目前只有一个成员，即减蛋综合征病毒(EDSV)，它们只是部分的含有I群禽腺病毒的共同抗原。禽腺病毒引起的临床症状不一：I群腺病毒引起肉鸡出现严重的肝脏炎症，导致高感染率和高死亡率。II群腺病毒引起鸡出现精神沉郁、脾脏肿大、血便、免疫抑制和死亡。III群腺病毒引起禽类产蛋下降和卵壳形成不全等症状。2015年来，禽腺病毒发病区域不断扩大，给我国养禽业造成了巨大经济损失。由于不同群腺病毒之间不能形成交叉保护，故对禽腺病毒进行准确的分群检测，对禽腺病毒感染的预防和控制具有十分重要意义。

当前对于禽腺病毒的检测主要集中在I群和III群，且采用单重凝胶电泳PCR或单重荧光定量PCR法，尚没有对禽腺病毒I群、II群、III群同时进行多重荧光PCR分群检测方法的公开。

发明内容

本发明目的在于提供一种同时检测禽腺病毒I、II、III群多重荧光定量PCR引物和探针。

本发明的另一目的在于提供一种同时检测禽腺病毒I、II、III群多重荧光定量PCR试剂盒。

本发明的再一目的在于提供一种同时检测禽腺病毒I、II、III群多重荧光定量PCR方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种同时检测禽腺病毒I、II、III群多重荧光定量PCR引物组，所述引物组的核苷酸序列如下所示：

I-FADV-F：5’-GCGAGATYCCKCAGATG-3’(SEQ ID NO：1)；

I-FADV-R：5’-GGAGGYCKGTTCTCGAGC-3’(SEQ ID NO：2)；

II-FADV-F：5’-GCTGTTGTGCGATCTGAAG-3’(SEQ ID NO：4)；

II-FADV-R：5’-CATTGGAGGAGCAACGGTA-3’(SEQ ID NO：5)；

III-FADV-F：5’-GTGGGTGATAACAGGATTGTG-3’，(SEQ ID NO：7)；

III-FADV-R：5’-CGCCAAAGGATTGTAAGCT-3’(SEQ ID NO：8)。

一种同时检测禽腺病毒I、II、III群多重荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，该试剂盒中含有上述所述的引物组。

进一步的，上述试剂盒中还含有探针组，所述探针组的核苷酸序列为：

I-FADV-P：5’-CCTGGGTCAAACCGAACATGTASTC-3’(SEQ ID NO：3)；

II-FADV-P：5’-TCAGCTTTATTAGAACCGCAAACGAG-3’(SEQ ID NO：6)；