[发明专利]一种快速灵敏检测河豚毒素TTX的方法

权利要求书

1.一种快速灵敏检测河豚毒素TTX的方法，其特征在于：将河豚毒素核酸适配体、小檗碱加入到磷酸缓冲溶液中，以小檗碱为荧光探针，河豚毒素核酸适配体为识别单元，加入待测物河豚毒素后诱导核酸适配体结构改变，核酸适配体与荧光探针小檗碱的结合受到影响，引起体系荧光信号改变，检测体系荧光强度值，计算获得待测物含量；

所述河豚毒素核酸适配体为：TTX-aptamer：5’-ttt tta aag tgt gcc cac gga gccgac agg-3’；

具体步骤如下：

（1）制作标准曲线：将氯化镁溶液、核酸适配体、荧光探针小檗碱分别加入磷酸盐缓冲溶液中，控制体系pH值为7.5，氯化镁浓度为2.0～2.5 mM，磷酸缓冲液浓度为1 mM～10 mM，荧光探针小檗碱浓度为20-40μM；核酸适配体浓度为0.3-0.6μM；然后加入若干浓度梯度的TTX，室温静置5-10min后测定溶液在激发波长为365 nm，发射波长为530 nm下的荧光强度F，以不加TTX的溶液的荧光强度为F₀，以TTX的浓度为横坐标，荧光强度变化值(F-F₀)/F₀为纵坐标，建立标准曲线及线性回归方程；

（2）测定实际待测生物样品中TTX的含量：待测生物样品中加入含有不同浓度的TTX，具体操作同步骤（1），测定溶液的荧光强度值，将得到的荧光强度值代入步骤一中所得到的线性回归方程中，计算得到实际待测生物样品中的TTX含量。

2.根据权利要求1所述的一种快速灵敏检测河豚毒素TTX的方法，其特征在于：所述TTX的浓度梯度指TTX浓度至少包括3、30、150、300、400、500 nM。