[发明专利]一种鉴别美洲大蠊的DNA条形码标准检测片段16S rRNA、试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种用于鉴别美洲大蠊的DNA条形码标准检测片段16S rRNA，所述标准检测片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种用于鉴别美洲大蠊的引物对，其特征在于，所述引物对用于扩增权利要求1所述DNA条形码标准检测片段16S rRNA，所述引物对中，正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。

3.一种用于鉴别美洲大蠊的试剂盒，包括权利要求2所述的引物对、PCR反应混合液；

所述PCR反应混合液包括：0.1U Taq聚合酶、500μmol/L dNTP、20mmol/L且pH＝8.3的Tris-HCl、100mmol/L氯化钾以及3μmol/L的氯化镁。

4.根据权利要求3所述用于鉴别美洲大蠊的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照，所述阳性对照为权利要求1所述DNA条形码标准检测片段16S rRNA或美洲大蠊成虫。

5.根据权利要求3或4所述的用于鉴别美洲大蠊的试剂盒，其特征在于，所述引物对中正反向引物的浓度均为10μmol/L。

6.一种利用权利要求3～5任意一项所述试剂盒鉴别美洲大蠊的方法，包括以下步骤：

提取待测样品的DNA，以待测样品的DNA或阳性对照DNA作为模板DNA，分别与引物对、PCR反应混合液和蒸馏水混合得到样品扩增体系和阳性扩增体系，分别进行PCR扩增；

将得到的样品PCR扩增产物和阳性PCR扩增产物分别以琼脂糖凝胶电泳分离，当待测样品的PCR扩增产物的电泳条带位于250～500bp条带位置并且与阳性PCR扩增产物的电泳条带位置相同，则待测样品属于美洲大蠊。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述待测样品包括待鉴定的昆虫鲜品或干品。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系共50μL：模板DNA2μL、正反向引物各2μL、PCR反应混合液25μL以及蒸馏水19μL。

9.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性3.5s，依次进行94℃35s、49℃35s、72℃45s的循环33个，72℃延伸5min。