[发明专利]基于物种特异性PCR法快速检测常见家畜肉的试剂盒

权利要求书

1.一种基于物种特异性PCR法快速检测常见家畜肉的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括DNA提取部分和检测部分，所述DNA提取部分的反应包括以下步骤：

1)取100mg样品，放入2mL灭菌离心管中，加入500μL十二烷基硫酸钠裂解液和20μL蛋白酶K，混匀后在55℃条件下水浴至溶液透明，期间不时颠倒混匀离心管；

2)加入等体积Tris饱和酚，颠倒混匀后12000r/min离心10min，将上清液转移到另一离心管，重复此步操作一次；

3)随后在离心管中加入0.5倍体积的Tris饱和酚和0.5倍体积的24:1的氯仿/异戊醇，混匀后12000r/min离心10min，吸取上清至另一新离心管；

4)加入0.1倍体积的乙酸钠溶液和2.5倍体积的4℃预冷的无水乙醇，颠倒混匀后有白色沉淀析出，在-20℃下沉淀2h；

5)将溶液和絮状沉淀均加入放入收集管中的吸附柱中，12000r/min离心5min后，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中；

6)在吸附柱中加入70％乙醇500μL以洗涤沉淀，12000r/min离心5min弃废液，将吸附柱放入收集管中，重复上步操作；

7)将吸附柱放入收集管中，12000r/min离心2min，弃废液，将吸附柱放在室温中晾干，彻底除去残余的乙醇；

8)将吸附柱放入干净的离心管中，悬空滴加100μL洗脱液TE，室温放置5min后12000r/min离心2min，将溶液收集到离心管中；

9)以TE做空白对照，用微量核酸、蛋白浓度测定仪测定所提取DNA的浓度及纯度，上样量均为1μL。

2.根据权利要求1所述的基于物种特异性PCR法快速检测常见家畜肉的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的反应体系为：2×Taq Plus Master Mix 25μL，体系中加入引物，10μmol·L^-1的上下游引物各2μL，DNA模板0.5μg，dd H₂O补足体系至50μL。

3.根据权利要求1所述的基于物种特异性PCR法快速检测常见家畜肉的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，*℃退火30s，72℃延伸60s，共35个循环；72℃延伸7min；其中，所述反应体系中的退火温度“*”按照牛、羊、猪、狗、马和驴的顺序分别为54℃、65℃、62℃、46℃、67℃和66℃。

4.根据权利要求1所述的基于物种特异性PCR法快速检测常见家畜肉的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒反应结束后最终的扩增结果采用1％或1.5％的琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像仪进行检测。