[发明专利]一种定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液；R1试剂包括电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液；R2试剂包括包被抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体的胶乳颗粒、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、缓冲液；胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液包括胰弹性蛋白酶1和稳定剂。该试剂盒是一种用胶乳增强免疫比浊法测定粪便中胰弹性蛋白酶1的装置，稳定准确、省时省力，可实现全自动快速测定样品的临床检测分析的效果，与传统免疫比浊试剂相比，检测灵敏度提高了10倍以上，多克隆抗体通过化学交联的方法偶联于胶乳颗粒表面，有效保护了抗体与抗原结合的活性区域，提高了检测灵敏度。

技术领域

本发明属于医学检验和体外诊断技术领域，涉及一种测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，具体地说涉及一种利用胶乳增强免疫比浊法定量测定人体粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒及其应用。

背景技术

粪胰弹性蛋白酶1(Fecal elastase 1,FE-1)是由外分泌腺分泌的一种胰腺内切蛋白酶，经十二指肠乳头排入十二指肠，其浓度降低时可特异性地提示发生慢性胰腺炎或胰腺外分泌功能不全的情况。粪胰弹性蛋白酶1在肠道内具有稳定性，通过检测其在粪便中的含量可间接反映胰腺外分泌的功能，这种方法安全、无创且不受胰酶替代治疗的影响。但是目前常用的免疫层析检测粪胰弹性蛋白酶1的方法存在准确性和特异性低的问题，且操作复杂，检测不便。

胶乳增强免疫比浊法(Latex-enhanced tμrbidimetric immμnoassay)是一种体液蛋白均相透射免疫比浊检测方法，原理是在纳米级高分子胶乳微球的表面交联多克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的透光性能；反应液透光性能(即吸光度)的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。其具有如下优点：1、省时省力：在均相反应体系中进行抗原、抗体反应，利用全自动生化分析仪直接测定反应液的吸光度值，几分钟就能获得结果，省却酶联免疫法反复孵育和洗板等烦琐操作步骤；2、稳定准确：操作步骤的简化也相应地避免了许多人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实地反映被测人体血液或粪便排泄物中胰弹性蛋白酶1的含量；3、应用广泛：胶乳增强免疫比浊法的灵敏度足以检测到胰弹性蛋白酶1的下限值，可完全满足临床检测要求，明显优于免疫层析法(胶体金)。但是现有技术中，目前尚无利用胶乳增强免疫比浊法测定人体粪便中胰弹性蛋白酶1的相关试剂盒及检测方法。

发明内容

为此，本发明正是要解决上述技术问题，从而提出一种利用胶乳增强免疫比浊法定量测定人体粪胰弹性蛋白酶1的试剂盒及其应用。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

本发明提供一种定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，所述试剂盒包括R1试剂、R2试剂和胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液；其中，所述R1试剂包括电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液；所述R2试剂包括包被抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体的胶乳颗粒、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、缓冲液；所述胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液包括胰弹性蛋白酶1和稳定剂。

作为优选，所述抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体通过化学交联偶联于所述胶乳颗粒表面，所述化学交联包括如下步骤：

S1、向交联缓冲溶液中加入胶乳颗粒和交联表面活性剂，得到胶乳颗粒溶液；

S2、将抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体溶解于交联缓冲溶液中，至浓度为1-10μmol/mL，得到抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体溶液；

S3、将所述胶乳颗粒溶液与所述抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体溶液混合，加入化学交联剂后在室温下反应2-4h，即得包被抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体的胶乳颗粒。

作为优选，所述电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁中的至少一种，在试剂中的浓度为0.1-10％。