[发明专利]一种微量DNA样品高通量测序文库的构建技术有效
| 申请号： | 201811025369.2 | 申请日： | 2018-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN109023537B | 公开（公告）日： | 2021-10-08 |
| 发明（设计）人： | 赵小东;康亚妮;胡丛霞;徐伟 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 崔佳佳;马莉华 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 微量 dna 样品 通量 序文 构建 技术 | ||
1.一种微量DNA样品高通量测序文库的构建方法，其特征在于，包括步骤：
(a)提供第一混合物，所述第一混合物包括DNA片段和辅助核酸片段，所述DNA片段包括来源于细胞基因组DNA；
(b)向所述第一混合物中的DNA片段和辅助核酸片段两端添加接头，从而得到含末端带有接头的DNA片段和辅助核酸片段的第二混合物；
(c)用特异性抗体捕获富集所述的第二混合物中的末端带有接头的DNA片段和辅助核酸片段；
(d)用特异性引物对上一步骤中经捕获富集的DNA片段和辅助核酸片段进行扩增，从而获得含扩增产物的第三混合物；
(e)用特异性针对所述辅助核酸片段的核酸酶对所述第三混合物进行处理，从而消化所述辅助核酸片段，从而获得含有富集所述DNA片段的扩增产物的第四混合物；
其中步骤(a)中所述DNA片段来自10-120pg 核酸或3-30个细胞，所述辅助核酸片段为经T→U变换的λDNA。
2.一种微量DNA样品高通量测序文库的构建方法，其特征在于，包括步骤：
(a)提供第一混合物，所述第一混合物包括DNA片段和辅助核酸片段，所述DNA片段包括来源于细胞基因组DNA；
(b)向所述第一混合物中的DNA片段和辅助核酸片段两端添加接头，从而得到含末端带有接头的DNA片段和辅助核酸片段的第二混合物；
(c)用特异性抗体捕获富集所述的第二混合物中的末端带有接头的DNA片段和辅助核酸片段；
(d) 用特异性酶去除所述辅助核酸片段；
(e)用特异性引物对上一步骤中经捕获富集的DNA片段进行扩增，从而获得含扩增产物的第三混合物；
其中步骤(a)中所述DNA片段来自10-120pg核酸或3-30个细胞，所述辅助核酸片段为经T→U变换的λDNA。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：对步骤（e）中富集的所述DNA片段的扩增产物进行建库，从而获得所述测序文库。
4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(a)中所述DNA片段来自30-100pg核酸，或者来自5-20个细胞的核酸。
5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述辅助核酸片段的长度为200-4000bp。
6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述辅助核酸片段的量为10-500ng。
7.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的DNA片段与所述辅助核酸片段的质量比为1:20-1:10000。
8.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述抗体的含量为1-20 ug。
9.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述抗体与第二混合物的重量比为10-300:1至2-50:1。
10.一种辅助核酸片段的用途，其特征在于，用于制备构建微量核酸样品文库的试剂，所述微量核酸样品为20-200 pg，所述辅助核酸片段为经T→U变换的λDNA。
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