[发明专利]一种微量DNA样品高通量测序文库的构建技术

说明书

本发明提供了一种微量DNA样品高通量测序文库的构建技术。具体地，本发明方法包括步骤：(a)提供DNA片段和辅助核酸片段；(b)向DNA片段和辅助核酸片段两端添加接头；(c)用特异性抗体捕获、富集末端带有接头的DNA片段和辅助核酸片段；(d)用特异性酶去除所述辅助核酸片段；(e)用特异性引物对所述步骤(c)中捕获、富集的DNA片段和辅助核酸片段进行扩增，从而获得扩增产物。本发明方法更适用于少量来源的微量样品的文库构建；文库质量好，无污染；成本较低，具有较高的普遍适用性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种微量DNA样品高通量测序文库的构建技术。

背景技术

随着生命科学技术的不断革新，人们对于生命科学的研究也越来越深入，从生命现象到内在机理再到遗传物质，而对于遗传物质的研究也逐渐从空间上的一维延伸到二维再到三维结构。核酸是生命遗传信息的载体，而核酸通常又是以很多种复杂的形态结构存在着。要揭开生命科学的神秘面纱，基因组学研究以及表观遗传学研究势在必行。第二代测序技术的出现，大大降低了测序成本，还大幅度提高了测序速度并保持了高准确性。在第二代测序技术不断完善的同时，第三代测序技术也初现端倪。然而，由于其中关键技术问题尚待解决，目前应用受到限制。

测序文库是含有某种生物体全部基因组DNA或者存在共性的DNA群体的随机片段的DNA克隆群，是进行全基因组测序、构建物理图谱、染色体步移、表观遗传修饰等研究的基础，为基因组学以及表观遗传学研究提供了强有力的技术平台。近年来，包括人、拟南芥、水稻等越来越多的基因组被测序，全基因组测序为重要的基因克隆、基因的系统进化以及基因组学研究提供了坚实的平台。但是对于一些特殊样本，获取难度大、基因组提取量少(低于50ng)，按照目前的建库流程和方法，无法获得可以用于高通量测序的文库。

测序文库质量的高低决定了测序文库作用的大小。然而，当其实样品量较少时，由于分子碰撞几率降低，连接反应和扩增反应难度都会大大增加，并且杂质的影响被放大，文库常常很难构建成功。

目前，针对低起始量DNA建库的方法主要有转座酶法和普通流程建库。而转座酶切割打断建库的方法易受样本质量的影响，导致切割失败，基因组无法正常片段化，在后续扩增中无法得到有效扩增。而普通流程建库无法进行低于20ng的建库，在起始量在50ng时，建库成功率仅为30％，且文库质量较差。

因此，本领域急需一种专门针对微量DNA样品通用型的高通量测序文库构建方法。

发明内容

本发明的目的就是提供一种微量DNA样品高通量测序文库的构建技术。

在本发明的第一方面，提供了一种微量DNA样品高通量测序文库的构建方法，包括步骤：

(a)提供第一混合物，所述第一混合物包括DNA片段和辅助核酸片段，所述DNA片段包括来源于细胞基因组DNA；

(b)向所述第一混合物中的DNA片段和辅助核酸片段两端添加接头，从而得到含末端带有接头的DNA片段和辅助核酸片段的第二混合物；

(c)用特异性抗体捕获富集所述的第二混合物中的末端带有接头的DNA片段和辅助核酸片段；

(d)任选地用特异性酶去除所述辅助核酸片段；

(e)用特异性引物对上一步骤中经捕获富集的DNA片段和辅助核酸片段进行扩增，从而获得含扩增产物的第三混合物；和

(f)任选地，用特异性针对所述辅助核酸片段的核酸酶对所述第三混合物进行处理，从而消化所述辅助核酸片段，从而获得含有富集所述DNA片段的扩增产物的第四混合物。

在另一优选例中，所述方法还包括：(g)对上一步骤中富集的所述DNA片段的扩增产物进行建库，从而获得所述测序文库。

在另一优选例中，所述的DNA片段是经片段化处理形成的DNA片段。