[发明专利]一种从A.terreus次级代谢产物中分离提取新化合物的制备方法在审
| 申请号： | 201811027654.8 | 申请日： | 2018-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN109280041A | 公开（公告）日： | 2019-01-29 |
| 发明（设计）人： | 黄芳芳;孙坤来;朱伟明;张译文;王斌;陈荫;赵玉勤 | 申请（专利权）人： | 浙江海洋大学 |
| 主分类号： | C07D311/04 | 分类号： | C07D311/04;A61P35/00;C12P17/06;C12R1/66 |
| 代理公司： | 杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 | 代理人： | 吴秉中 |
| 地址： | 316000 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 次级代谢产物 分离提取 遗传修饰 调控剂 烟酰胺 菌株 胜肽 制备 发酵 高效液相色谱分离 抗肿瘤效果 真菌培养基 萃取发酵液 沉默基因 发酵培养 分离纯化 孢子制备 培养基 菌丝体 浓缩物 柱色谱 萃取 修饰 激活 协同 | ||
1.一种从A.terreus次级代谢产物中分离提取新化合物的制备方法，包括孢子制备、菌株发酵、次级代谢产物萃取和分离纯化，其特征在于：所述菌株发酵步骤为：向真菌培养基中添加表观遗传修饰调控剂TSA、烟酰胺、二胜肽，搅拌均匀，静置，发酵培养30天。
2.根据权利要求1所述的一种从A.terreus次级代谢产物中分离提取新化合物的制备方法，其特征在于：所述表观遗传修饰调控剂TSA的终浓度为5-25μM。
3.根据权利要求1所述的一种从A.terreus次级代谢产物中分离提取新化合物的制备方法，其特征在于：所述烟酰胺的添加量为培养基重量的0.05-0.1％，二胜肽添加量为培养基重量的0.05-0.15％。
4.根据权利要求1所述的一种从A.terreus次级代谢产物中分离提取新化合物的制备方法，其特征在于：所述孢子制备步骤为：将菌株A.terreus OUCMDZ-2739取出复苏10min，用接种环蘸取，在PDA斜面固体培养基中均匀划线，28℃培养至成熟，得丰满孢子，备用。
5.根据权利要求1所述的一种从A.terreus次级代谢产物中分离提取新化合物的制备方法，其特征在于：所述次级代谢产物萃取步骤为：发酵完成后，用绢布将菌丝体和发酵液分离；发酵液用乙酸乙酯萃取；菌丝体加入80％的丙酮-水、2-甲基丙氨酸和柠檬酸钙，浸泡，超声组织破碎仪将菌丝体破碎，萃取，过滤，上清液用乙酸乙酯萃取；合并萃取液，减压浓缩，得最终发酵萃取物。
6.根据权利要求1所述的一种从A.terreus次级代谢产物中分离提取新化合物的制备方法，其特征在于：所述2-甲基丙氨酸的添加量为培养基质量的1-3％，柠檬酸钙的添加量为培养基质量的0.5-1.5％。
7.根据权利要求1所述的一种从A.terreus次级代谢产物中分离提取新化合物的制备方法，其特征在于：所述分离纯化步骤为：将最终发酵萃取物依次用硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、RP-18反相硅胶柱色谱、高效液相色谱进行分离纯化，所用洗脱剂依次为石油醚-二氯甲烷-甲醇、二氯甲烷-甲醇、甲醇-水、甲醇-水，得到从A.terreus次级代谢产物中分离提取的新化合物。
8.根据权利要求1所述的一种从A.terreus次级代谢产物中分离提取新化合物的制备方法，其特征在于：从A.terreus次级代谢产物中分离提取的新化合物的结构式为：
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