[发明专利]一种猪圆环病毒3型毒株及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201811031496.3 | 申请日： | 2018-09-05 |
| 公开（公告）号： | CN109251897A | 公开（公告）日： | 2019-01-22 |
| 发明（设计）人： | 刘爵;姜海军;王丹;韦莉;王菁;朱珊珊;全荣;侯磊;褚军;李子璇;郭雨欣;奚衍洋;宋慧琦;袁枫 | 申请（专利权）人： | 北京市农林科学院 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N5/10;A61K39/12;A61P31/20 |
| 代理公司： | 北京智为时代知识产权代理事务所(普通合伙) 11498 | 代理人： | 王加岭;杨静 |
| 地址： | 100097 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 猪圆环病毒 感染性克隆 圆环病毒 病毒 毒株 种猪 细胞培养 制备方法和应用 传代 间接免疫荧光 氨基葡萄糖 细胞培养物 动物回归 连续传代 适应毒株 贴壁生长 细胞病变 疫苗研究 致病机制 猪肾细胞 接种物 致病力 仔猪 单层 滴度 日龄 接种 致死 复制 细胞 收获 试验 观察 应用 发现 研究 | ||
1.一种猪圆环病毒3型毒株，其特征在于，其含有包括如SEQ ID NO.1所示的碱基序列。
2.一种包含有如SEQ ID NO.1所示的碱基序列的重组质粒。
3.如权利要求2所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒的原始载体为质粒pBluescript II SK载体，其碱基序列如SEQ ID NO.2所示。
4.如权利要求2所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒适于在单层猪肾细胞PK15细胞中生长。
5.一种猪圆环病毒3型毒株的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：
S1、将权利要求2所述的重组质粒，转染单层猪肾细胞PK15细胞中培养，之后消化；
S2、加含有10％小牛血清的DMEM培养基培养，待细胞接近长成单层时，弃去细胞培养液；
S3、加入适量D-氨基葡萄糖溶液，作用后，弃去D-氨基葡萄糖；
S4、用适量的灭菌PBS轻轻洗细胞3次，然后再加入含2％血清的DMEM维持液继续培养96小时，即获得猪圆环病毒3型毒株。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，培养时间为72小时，在步骤S2中，培养时间为18-24小时。
7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤S3中，所述D-氨基葡萄糖溶液为含300m mol/L的D-氨基葡萄糖的DMEM培养液，用量以能完全覆盖PK15细胞单层为准。
8.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤S3中，所述加入D-氨基葡萄糖溶液后，在37℃作用30min。
9.如权利要求1所述的猪圆环病毒3型毒株或权利要求5-8中任一项所说的制备方法获得的猪圆环病毒3型毒株在制备防治猪圆环3型病毒感染引起的疾病的疫苗中的应用；或在制备疫苗生产毒种中的应用。
10.如权利要求1所述的猪圆环病毒3型毒株或权利要求5-8中任一项所说的制备方法获得的猪圆环病毒3型毒株在评价猪圆环3型疫苗的有效性及保护效果中的应用。
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