[发明专利]使用短短芽孢杆菌分泌表达超敏蛋白的方法

权利要求书

1.一种使用短短芽孢杆菌(Brevibacillus choshinensis)作为宿主菌，发酵培养生产超敏蛋白的方法，所述的方法包括如下步骤，

(1)将所述超敏蛋白的编码基因插入到以短短芽孢杆菌为宿主的质粒中，

(2)将插入了所述超敏蛋白的质粒转入短短芽孢杆菌宿主中，

(3)发酵培养所述短短芽孢杆菌，

(4)自发酵液中分离浓缩所述超敏蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤(1)所述的超敏蛋白为来源于菌株Erwinia amylovora的GeneBank编号为M92994.3的harpinEa蛋白；

步骤(1)所述的质粒为pNC-hisT质粒。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤(2)所述的将质粒转入短短芽孢杆菌宿主中的方法为电击转化方法。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤(3)所述的发酵培养的培养条件为：T2培养基、温度30～33℃、转速120～200rpm、发酵培养时间24～60h，优选的，所述发酵培养条件是：T2培养基、温度33℃、转速120rpm、发酵培养时间48h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤(4)所述的分离提取所述超敏蛋白的步骤是：收集发酵后的菌液，离心收集上清，对上清液进行切向流超滤及浓缩，获得超敏蛋白超滤浓缩液。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的切向流超滤的步骤是：

(1)使用30KD孔径的中空纤维柱对上清液进行超滤，收集滤过液；

(2)使用10KD孔径的中空纤维柱对回收滤液进行浓缩，浓缩至1/10体积时，加入等体积的蛋白缓冲液，所述蛋白缓冲液的配方为20mM Tri-HCl、400mM NaCl、1mM EDTA，重复三次；

(3)继续使用10KD孔径的中空纤维柱对步骤(2)所获得的蛋白浓缩液进行浓缩，浓缩至1/8体积，即得超敏蛋白超滤浓缩液。

7.权利要求1-6任一所述的方法制备获得的超敏蛋白。

8.权利要求1-6任一所述的方法在制备植物促生长制剂和/或植物抗虫制剂中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的植物是茄科植物。