[发明专利]一种人类哮喘风险基因多态性检测试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人类哮喘风险基因多态性检测试剂盒及其制备方法和应用。所述试剂盒由分别用于扩增与人类哮喘风险相关的CYSLTR1和GSDML 2个基因多态性的PCR预混反应液、阳性对照品及阴性对照品组成，所述PCR预混反应液包含用于扩增各位点的特异性引物序列组、探针组和PCR反应液，所述特异性引物组由普通的外引物和带荧光标签的特异性的ARMs引物组成。本发明所述试剂盒用于检测人类哮喘风险基因多态性具有灵敏度高、特异性高、操作简便、结果可靠等优点，且能在1小时内完成检测，并且结果判读简单客观。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人类哮喘风险基因多态性检测试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

哮喘是一种非常复杂的表型异质性疾病，是受遗传因素和环境因素双重影响的多基因遗传病，到目前为止与哮喘相关的候选基因已超过200个，其中在多个人群中得到独立重复实验验证的基因已达到43个。全基因组关联研究(GWAS)报道显示，17号染色体上的GSDMB和ORMDL3基因与哮喘的发病密切相关，其中位于GSDMB/ORMDL3基因CpG序列中的rs7216389(C>T)、rs4065275(A>G)和rs12603332(T>C)三个SNP位点均已证实和哮喘相关。其中rs7216389位于GSDMB基因，rs4065275和rs12603332位于ORMDL3基因，而位于GSDMB基因上进化保守的rs7216389(C>T)位点是哮喘最强烈的相关标记，在临床检测上更有意义。与成人相比，携带rs7216389位点T等位基因的儿童和青少年哮喘发作的风险和严重程度更高。

此外，除了遗传因素，哮喘在发病过程由多种炎性细胞和多种细胞因子参与，研究已证实半胱氨酰白三烯受体CysLTR介导CysLTs半胱氨酰白三烯在哮喘的整个病理过程中发挥重要作用。CysLTR表达广泛，存在于大部分哮喘炎症细胞和结构细胞表面，其分子和蛋白水平的表达改变与呼吸道炎症情况密切相关。CysLTR基因多态性与哮喘易患型及对治疗药物的敏感性存在一定的相关性。研究表明，CysLTR1的rs320995(927T>C)位点与哮喘的易感性相关，且C等位携带的男性哮喘患者具有更高的危险性。

目前临床上主要采取以下四种方式检测基因的多态性：

1.PCR-测序法

2.高分辨率溶解曲线法

3.芯片杂交法

4.Taqman-qPCR法

PCR-测序法灵敏度低，实验耗时长，不适合临床推广；芯片杂交法，检测灵敏度低并且特异性差，容易出现假阳性结果；高分辨率溶解曲线法对设备要求特殊，不适合临床推广，且检测灵敏度不高。Taqman-qPCR法，检测灵敏度高，但往往由于位点序列原因，导致检测特异性不高，并且其通过Genotyping方法进行分型，对样本数量和多态性分布有一定要求，不适合检测突变频率过低的位点。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，目的在于提供一种人类哮喘风险基因多态性检测试剂盒及其制备方法和应用。本试剂盒具有高灵敏度、高特异性、低成本高通量、操作简便、实验周期短等特点，可以快速精准的对人类基因组DNA中哮喘风险基因多态性进行检测。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种人类哮喘风险基因多态性检测引物组，所述引物组由普通的外引物和带荧光标签的特异性的ARMs引物组成，具体序列如下：

CYSLTR1-F1：5’-TTGTGGACTTCTCTTCCTTC-3’ SEQ ID NO.1

CYSLTR1-F2：5’-FAM-ATCCCTTGTCATCGTGGCTGTCTACTTTC-3’ SEQ ID NO.2