[发明专利]一种测定游离轻链Kappa浓度的试剂盒及制备方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种测定游离轻链Kappa浓度的试剂盒及制备方法。本发明采用的技术方案是:一种测定Kappa游离轻链浓度的试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，其中试剂R2中加入了生物素和链霉亲和素,且生物素结合游离轻链Kappa抗体比例为2：1，链霉亲和素结合生物素‑羊抗人Kappa游离轻链抗体比例为1:1。本发明的优点是:本发明的测定Kappa游离轻链浓度的试剂盒，采用级联放大反应，即羊抗人Kappa游离轻链抗体连接生物素1:2，再与链霉亲和素1:1混合反应，可明显改善重复性和灵敏度，线性范围可做到2‑70mg/L。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种测定游离轻链Kappa浓度的试剂盒及制备方法。

背景技术

免疫球蛋白(Ig)轻链分为κ(kappa)和λ(lambda)2个型别，每个Ig分子上只有一个型别的轻链，人类κ(kappa)和λ(lambda)的比例为6∶4。轻链为能自由通过肾小球基底膜的小分子蛋白质，在肾小管被重吸收回到血循环中，所以正常人尿中只有少量轻链存在。当发生代谢失调和多发性骨髓瘤时，血中会出现大量游离轻链，并由尿中排出，即为本周蛋白(Bence-Jones蛋白)。正常人血清游离轻链浓度为3～19mg/L，其中λ型游离轻链为6～26mg/L，κ/λ比值为0.26～1.65。异常情况的κ型游离轻链以及和κ/λ比值、或异常λ型游离轻链和κ/λ比值、或同时三者均异常等情况，对非分泌性骨髓瘤(nonsecretory myeloma,NSM)的敏感性为65％～70％，症(monoclonal gammopathies,MGP)的敏感性为88％～98％；有助于单克隆轻链病、AL-淀粉样变的早期诊断，也可用于化疗或自身外周血干细胞移植后是否复发的监测，如果化疗或移植效果好，则病患血清κ型游离轻链、λ型游离轻链以及κ/λ比值均在正常水平或相比治疗前有明显改善。对于游离轻链的测定，国内目前主要通过胶乳增强比浊方法测定Kappa游离轻链；但在临床应用中，Freelite系列的Kappa游离轻链测定试剂存在大量的非特异反应，且试剂应用的灵敏度和重复性差。因此，应该提供一种新的技术方案解决上述问题。

发明内容

本发明的目的是：提供一种灵敏度高，重复性好的一种测定游离轻链Kappa浓度的试剂盒及制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种测定游离轻链Kappa浓度的试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：

所述试剂R2的各组分及浓度包括：

进一步的技术方案：

所述试剂R1中的第一缓冲液A和第一缓冲液B为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓液中的一种或几种的组合。

所述试剂R1中的防腐剂为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种或几种的组合。

所述试剂R2中第二缓冲液A和第二缓冲液B为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓液中的一种或几种的组合。

所述试剂R2中稳定剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶、甘露醇中的一种或几种的组合。

所述试剂R2中的助悬剂为葡萄糖、D-海藻糖、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、乳糖、丙三醇中的一种或几种的组合。

所述试剂R2中的防腐剂为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞等中的一种。

所述R1试剂pH在6.00-8.50之间，所述R2试剂pH在6.00-8.50之间。