[发明专利]一种滨麦基因组特异分子标记的应用

说明书

本发明公开了一种滨麦基因组特异分子标记的应用，将滨麦EST‑STS引物标记进行PCR扩增，通过数据库比中国春，普通小麦及华山新麦草，得到滨麦特异的序列。对本发明我们一共得到了滨麦的特异序列有1条。通过滨麦的特异序列，对开发新的分子标记，有效区分普通小麦及普通小麦与近缘物种滨麦的衍生后代奠定了基础。

技术领域

本发明属于生物基因工程技术领域，涉及一种滨麦基因组特异分子标记的应用。

背景技术

滨麦(Leymusmollis(Trin)Hara.NsNsXmXm 2n＝28)属禾本科(Poaceae)、小麦族(Triticeae)、大麦亚族(Hordinae)、赖草属(LeymusHochst)的一个四倍体多年生小麦近缘种野生植物，主要生长在海岸和内陆干旱地区，分布于我国北方沿海地区，俄罗斯(远东地区)、朝鲜、日本和北美。具有抗条锈病、白粉病、赤霉病、蚜虫、抗旱、耐盐碱、大穗多花等优良特性。上世纪五十年代，苏联科学家开始进行小麦和赖草属包括滨麦的杂交，经胚拯救技术获得了四倍体、六倍体小麦与滨麦的杂种，六十年代获得了杂种的双二倍体，七十年代获得了硬粒小麦与滨麦的不完全双二倍体。傅杰等创造了一系列具有优良农艺性状的小麦-滨麦异源种质系，这些种质系仍带有部分滨麦的特性，尤其是对条锈病的抗性。利用远缘杂交、染色体工程等多种手段将滨麦中的多种类型优良基因导入到普通小麦中，创制携带滨麦优异性状的小麦新种质，丰富小麦育种的遗传基础，挖掘抗病资源，创制丰富的种质材料，是进行小麦遗传改良的有效途径和重要方向。在滨麦遗传物质向普通小麦转移的过程中，滨麦遗传物质的准确鉴定与追踪是重要而迫切的工作。这些SSR标记和EST-STS标记均可在普通小麦-滨麦衍生后代第一部分同源群到第七部分同源群附加系中扩增出滨麦基因组的特异片段，为滨麦优异基因导入到普通小麦遗传背景中的转移提供了技术支持。

利用滨麦特异引物，扩增出滨麦特异的序列，为后续的分子标记开发工作奠定了基础。因此，建立滨麦特异序列的主要技术为：利用SSR和EST-STS标记引物在普通小麦7182、滨麦及华山新麦草中扩增出对应的条带，通过与参考基因组测序比对，得到滨麦特异序列。

缩略语和关键术语定义

SSR：简单重复序列标记，SSR是以1～6个碱基为基本单位的串联重复序列，其具有丰富的多态性并且随机分布于整个基因组，根据重复单位大小、序列以及拷贝数的不同而呈现长度多态性。SSR技术根据重复序列的两端序列设计特异性引物，通过PCR反应扩增出不同长度的PCR产物。

EST-STS：表达序列标签，EST是指从不同组织来源的cDNA文库中随机挑选克隆进行5’端或3’端测序得到的长约300～400bp的基因表达序列片段，其数目则对应着其代表的基因表达的拷贝数，基因表达次数越多，相应的cDNA克隆越多，因此对克隆的测序分析可以了解基因的表达丰度。近年来由此形成的技术路线被广泛应用于基因识别、绘制基因表达图谱、寻找新基因等研究领域，并且取得了显著成效。

发明内容

本发明的目的在于提供一种滨麦基因组特异分子标记引物在滨麦品种鉴定过程中的应用。将SSR和EST-STS标记引物进行扩增，便于区分滨麦与普通小麦7182和华山新麦草的不同条带。

其具体技术方案为：

一种滨麦基因组特异分子标记引物在滨麦品种鉴定过程中的应用。

在滨麦(Leymusmollis(Trin)Hara.NsNsXmXm 2n＝28)现有的特异分子标记中挑选了17个特异性较好的EST标记进行了PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳、胶回收、连接转化、测序等相关实验来进一步验证筛选出的滨特异性分子标记是否能区分滨麦和其他物种，尤其是滨麦与华山新麦草之间的区分，故而也可鉴定出滨麦和华山新麦草，有关报道和研究表明，滨麦和华山新麦草的亲缘关系较近，滨麦的Ns基因组来自于华山新麦草含有滨麦外源染色体的滨麦和普通小麦的衍生后代。挑选的特异性标记如表1所示：

表1