[发明专利]一种TNF相关激活诱导细胞因子的制备方法在审
| 申请号： | 201811035672.0 | 申请日： | 2018-09-06 |
| 公开（公告）号： | CN110878319A | 公开（公告）日： | 2020-03-13 |
| 发明（设计）人： | 聂丽;刘广洛 | 申请（专利权）人： | 上海张江生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/62;C07K19/00;C07K14/705 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201203 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 tnf 相关 激活 诱导 细胞因子 制备 方法 | ||
1.一种TNF相关激活诱导细胞因子的制备方法，其特征在于， 所述制备方法包括：1）基因合成，合成含有TNF相关激活诱导细胞因子基因及原核系统表达标签的基因序列；2）基因转化及诱导表达；3）含有原核系统表达标签的融合蛋白质的纯化；4）原核系统表达的表达标签的去除；5）目标蛋白质TNF相关激活诱导细胞因子的纯化。
2.根据权利要求1所述的TNF相关激活诱导细胞因子的制备方法，其特征在于，所述原核表达系统的表达标签为His或GST或TRX。
3.根据权利要求2所述的TNF相关激活诱导细胞因子的制备方法，其特征在于，所述原核表达系统的表达标签为GST。
4.根据权利要求1所述的TNF相关激活诱导细胞因子的制备方法，其特征在于，所述的原核系统表达的表达标签的去除，是经过含有表达标签的融合蛋白质的自切而去除表达标签。
5.根据权利要求4所述的TNF相关激活诱导细胞因子的制备方法，其特征在于，所述的原核系统表达的表达标签是GST标签，GST标签的去除是经过含有GST表达标签的融合蛋白质的自切而去除。
6.根据权利要求5所述的TNF相关激活诱导细胞因子的制备方法，其特征在于，所述融合蛋白质的自切条件为：缓冲液中增加1-10mmol/L的二价金属离子，pH为7.5-8.5，在30℃条件下自切24至72小时。
7.根据权利要求6所述的TNF相关激活诱导细胞因子的制备方法，其特征在于，所述融合蛋白质的自切过程中增加的二价金属离子为Ca2+或Mg2+或Zn2+。
8.根据权利要求7所述的TNF相关激活诱导细胞因子的制备方法，其特征在于，所述融合蛋白质的自切过程中增加的二价金属离子为Ca2+。
9.根据权利要求8所述的TNF相关激活诱导细胞因子的制备方法，其特征在于，所述融合蛋白质的自切条件为：缓冲液中增加4mmol/L的Ca2+，pH为8.0，在30℃条件下自切72小时。
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