[发明专利]一种人类环状RNA过表达载体框架、过表达载体及其制备方法在审
| 申请号： | 201811035925.4 | 申请日： | 2018-09-05 |
| 公开（公告）号： | CN109097395A | 公开（公告）日： | 2018-12-28 |
| 发明（设计）人： | 董先辉;王晓香;陈业兴;周剑 | 申请（专利权）人： | 广州伯信生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京细软智谷知识产权代理有限责任公司 11471 | 代理人： | 付登云 |
| 地址： | 510000 广东省广州市广州高新技术产业*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达载体 环状RNA 表达效率 成环 前体 制备 线状形式 假阳性 通用的 线状 体内 | ||
1.一种人类环状RNA过表达载体框架，其特征在于，包含启动子-Alu环化元件-多克隆位点-反向互补Alu环化元件-终止子，所述Alu环化元件的序列如SEQ ID NO:1所示，所述反向互补Alu环化元件的序列如SEQ ID NO:2所示。
2.根据权利要求1所述的人类环状RNA过表达载体框架，其特征在于，所述Alu环化元件还包含内含子AG受体序列，所述内含子AG受体序列如SEQ ID NO:3所示。
3.根据权利要求1所述的人类环状RNA过表达载体框架，其特征在于，所述反向互补Alu环化元件还包含内含子GT供体序列，所述内含子GT供体序列如SEQ ID NO:4所示。
4.根据权利要求1所述的人类环状RNA过表达载体框架，其特征在于，所述启动子为pCMV启动子。
5.根据权利要求1所述的人类环状RNA过表达载体框架，其特征在于，所述终止子为BGHpA终止子。
6.根据权利要求1所述的人类环状RNA过表达载体框架，其特征在于，所述多克隆位点依此包含第一酶切位点、填充序列和第二酶切位点。
7.根据权利要求6所述的人类环状RNA过表达载体框架，其特征在于，所述第一酶切位点为BamH I，第二酶切位点为EcoR I。
8.一种人类环状RNA过表达载体，其特征在于，所述人类环状RNA过表达载体包括权利要求1-7任一所述人类环状RNA过表达载体框架，且所述多克隆位点依此包含第一酶切位点、目的环状RNA序列和第二酶切位点。
9.权利要求1-7任一所述人类环状RNA过表达载体框架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、采用基因合成的方式合成包括Alu环化元件-多克隆位点-反向互补Alu环化元件的核心元件，并在所述核心元件的上游和下游分别添加酶切位点；
B、使用与所述核心元件上游和下游匹配的连接酶，将启动子和终止子分别连入所述核心元件的上游和下游，得到所述人类环状RNA过表达载体框架。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述核心元件上游添加的酶切位点为HindⅢ，所述核心元件下游添加的酶切位点为xhol。
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