[发明专利]一种人类环状RNA过表达载体框架、过表达载体及其制备方法

说明书

本发明提供了一种人类环状RNA过表达载体框架、过表达载体及其制备方法。所述人类环状RNA过表达载体框架及载体，能够作为通用的环状RNA过表达载体，取得了环状RNA过表达领域的突破；同时，所述环状RNA过表达载体解决了circRNA体内前期RNA成环效率低的问题，将成环率提高到95％，弥补circRNA前体不成环主要以线状形式存在的缺陷，避免了线状circRNA前体对环状circRNA功能引发的假阳性问题；且大大提高了circRNA过表达效率，将过表达效率提到500‑2000倍。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人类环状RNA过表达载体框架、过表达载体及其制备方法。

背景技术

环状RNA(Circular RNAs)是广泛且多样地存在于多种生物细胞中，具有调控基因表达作用的一类内源性ncRNA分子。最早于20世纪70年代在RNA病毒中被发现。之后几十年，人们在一些转录本中也发现了一些由外显子构成的circRNA，如结肠直肠癌缺失基因转录本、人类Ets-1基因转录本等，但当时它们被认为是转录的“噪音”，未引起人们太多的关注。而近年来，随着生物信息学技术的快速发展，Salzman等、Jeck等、Memczak等及Guo等分别在人类和小鼠的多种细胞中发现了成千上万种circRNA。

近年来，随着高通量测序技术及基因芯片技术的高速发展，研究者们在真核生物体内发现了越来越多的circRNA。如Salzman等发现了数以百计的与人类基因表达相关的circRNA。Jeck等在人类成纤维细胞中检测到了高达25000多种circRNA。

目前发现的circRNA，根据其在基因组中的来源及其构成序列的不同，可以分为3类：外显子来源的环形RNA分子，内含子来源的环形RNA分子和由外显子和内含子共同组成的环形RNA分子。

CircRNA具有以下特征：表达水平差异较大；具有序列保守性；偏好于细胞浆中；不易被核酸外切酶RNase R降解；外显子来源为主；属于ncRNA；可充当ceRNA的角色调控靶基因的表达；在转录或转录后水平发挥调控作用。这些特征使得circRNA在研究疾病发生机制、干预靶点和生物学标志物等方面显示显著优势。

研究表明，circRNA参与诸多生理及病理过程包括肿瘤、神经系统疾病、动脉粥样硬化、糖尿病及病毒性肝炎等有关。这其中与circRNA在转录及转录后水平具有非常重要的基因表达调控作用相关。发挥功能的分子机制主要包括：miRNA海绵作用、调控基因转录、调控RNA结合蛋、参与部分蛋白质翻译等方面；同时，circRNA其不易被核酸外切酶RNase R降解的优势，使其在作为分子标记物的诊断价值在疾病的发现和治疗中发挥着巨大作用。

现有的研究中，仅有某个基因的环状RNA过表达载体，如pCDNA3-CIRS-7过表达载体、laccase 2基因的过表达载体等，并没有一个通用载体表达人类的所有circRNA。并且，目前还存在circRNA体内前期RNA成环效率低的问题，从而导致线状circRNA前体对环状circRNA功能引发的假阳性问题，也影响了circRNA过表达效率。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种人类环状RNA过表达载体框架、过表达载体及其制备方法。所述人类环状RNA过表达载体框架及载体，能够作为通用的环状RNA过表达载体，取得了环状RNA过表达领域的突破；同时，所述环状RNA过表达载体解决了circRNA体内前期RNA成环效率低的问题，将成环率提高到95％，弥补circRNA前体不成环主要以线状形式存在的缺陷，避免了线状circRNA前体对环状circRNA功能引发的假阳性问题；且大大提高了circRNA过表达效率，将过表达效率提到500-2000倍。

本发明的目的是提供一种人类环状RNA过表达载体框架；

本发明的再一目的是提供一种人类环状RNA过表达载体；