[发明专利]一种从水母刺丝囊提取液中分离硫氧还蛋白的方法在审
| 申请号： | 201811036968.4 | 申请日： | 2018-09-06 |
| 公开（公告）号： | CN109096382A | 公开（公告）日： | 2018-12-28 |
| 发明（设计）人： | 李荣锋;李鹏程;于华华;刘松;邢荣娥;陈晓琳;王雪芹 | 申请（专利权）人： | 中国科学院海洋研究所 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C07K1/18;C07K1/16 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 李颖 |
| 地址： | 266071 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 刺丝囊 提取液 水母 硫氧还蛋白 分离硫 蛋白 阴离子交换树脂 分离和纯化 研究和应用 凝胶过滤 脱盐柱 生物技术 | ||
1.一种从水母刺丝囊提取液中分离氧还蛋白的方法，其特征在于：水母刺丝囊提取液依次经过HiTrap Desalting凝胶过滤脱盐柱和Q Sepharose High Performance的阴离子交换树脂进行分离和纯化，得到纯化的硫氧还蛋白。
2.按权利要求1所述的从水母刺丝囊提取液中分离硫氧还蛋白的方法，其特征在于：
1)将霞水母刺丝囊提取液利用HiTrap Desalting凝胶过滤脱盐柱，经Tris-HCl作为缓冲液去除样品中大量的盐组分，收集蛋白吸收峰待用；
2)步骤1)中所得蛋白样品，利用Q Sepharose High Performance的阴离子交换树脂分离，依次采用Tris-HCl缓冲液A和含1M NaCl的Tris-HCl缓冲液B进行梯度洗脱，收集各洗脱峰，浓缩后进行SDS-PAGE电泳测定和PMF肽指纹图谱鉴定，即获得纯化的硫氧还蛋白。
3.按权利要求1或2所述的从水母刺丝囊提取液中分离硫氧还蛋白的方法，其特征在于：所述步骤1)中洗脱液为pH7.8，浓度为10～30mM的Tris-HCl缓冲液，洗脱流速为3～10mL/min。
4.按权利要求1或2所述的从水母刺丝囊提取液中分离硫氧还蛋白的方法，其特征在于：所述步骤2)中所使用的洗脱液为pH7.8，浓度为10～30mM的Tris-HCl洗脱液A和含1MNaCl的pH7.8，浓度为10～30mM的Tris-HCl洗脱液B进行梯度洗脱，洗脱梯度为用10柱体积使洗脱液B的浓度由0％升高到20％，之后用3个柱体积使洗脱液B的浓度由20％升高至100％，流速为1～3mL/min。
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