[发明专利]一种从水母刺丝囊提取液中分离硫氧还蛋白的方法

说明书

本发明涉及生物技术，具体说是一种从水母刺丝囊提取液中分离硫氧还蛋白的方法。水母刺丝囊提取液依次经过HiTrap Desalting凝胶过滤脱盐柱和Q Sepharose High Performance的阴离子交换树脂进行分离和纯化，得到纯化的硫氧还蛋白。本发明具快速、简便的特点，为获得硫氧还蛋白及其深入研究和应用提供了重要的指导和基础。

技术领域

本发明涉及生物技术，具体说是一种从水母刺丝囊提取液中分离硫氧还蛋白的方法。

背景技术

水母是世界上最古老而神秘的生物之一，大约在6.5亿年前就已经存在于地球上。水母是一种胶质状的浮游动物(Gelatinous zooplankton)，包括四大类群：刺胞动物门(Cnidaria)的水螅水母类(Hydrozoans)、管水母类(Siphonophores)、钵水母类(Scyphozoans即：True jellyfish)以及栉水母门的栉水母类(Ctenophores)。水母在我国分布很广，从广东、海南岛沿海一直到辽宁沿海均有分布。在我国海域已记录的水母约有400种，占全球已记录种类的10％左右。海洋水母种类繁多，数量巨大，遍布世界各个海域，是海洋浮游动物的重要组成部分，在海洋生物生态系统中占有重要地位。水母类的食性很广，几乎无选择地摄食一切可获得的浮游动物，还包括许多海洋动物的卵和幼虫(包括幼鱼)，甚至于同类相食。此外，水母类还需取食一定量的浮游植物和有机碎屑以满足其能量需求。霞水母属刺胞动物门(Cnidaria)，钵水母纲(Scyphomedusae)，旗口水母目(Semaeostomeae)，霞水母科(Cyaneidae)，在我国海域分布较广。

水母含有丰富的生物活性成分，具有很好的食用和药用价值。自古以来，水母既能供人食用，又可入药为人治病，早在《本草纲目》中就有记载，如气味咸温，无毒，主治妇人劳损，积血带下，小儿风疾，丹毒和汤火伤等。但是，水母提取物中成分众多，并且某些组分之间的结构、性质非常相近，分离纯化难度大；第二，水母成分多数是蛋白类物质，具有热敏感性，容易受到温度等环境因素的影响而致使其活性降低甚至丧失，这就造成在分离纯化过程中易降解。第三，水母种类的不同，其生理结构以及体内所含的成分也存在较大的差异，这就致使不同种类水母活性成分的分离纯化工作难以直接效仿，对于不同蛋白的纯化，只能通过进行特异的实验条件才能获得。所以，水母中活性成分的分离纯化工作具有很大的挑战性和创新性。

发明内容

本发明的目的是一种从水母刺丝囊提取液中分离硫氧还蛋白的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种从水母刺丝囊提取液中分离氧还蛋白的方法，水母刺丝囊提取液依次经过HiTrap Desalting凝胶过滤脱盐柱和Q Sepharose High Performance阴离子交换树脂进行分离和纯化，得到纯化的硫氧还蛋白。

进一步的说：

1)将霞水母刺丝囊提取液利用HiTrap Desalting凝胶过滤脱盐柱，经Tris-HCl作为缓冲液去除样品中大量的盐组分，收集蛋白吸收峰待用；

2)步骤1)中所得蛋白样品，利用Q Sepharose High Performance的阴离子交换树脂分离，依次采用Tris-HCl缓冲液A和含1M NaCl的Tris-HCl缓冲液B进行梯度洗脱，收集各洗脱峰，浓缩后进行SDS-PAGE电泳测定和PMF肽指纹图谱鉴定，即获得纯化的硫氧还蛋白。

所述步骤1)中洗脱液为pH7.8，浓度为10～30mM的Tris-HCl缓冲液，洗脱流速为3～10mL/min。