[发明专利]一种抑制牦牛RXFP2基因表达的shRNA、慢病毒及其构建方法和用途有效
| 申请号： | 201811038693.8 | 申请日： | 2018-09-06 |
| 公开（公告）号： | CN109136225B | 公开（公告）日： | 2020-07-17 |
| 发明（设计）人： | 吴晓云;梁春年;阎萍;郭宪;丁学智;王宏博;褚敏;裴杰;包鹏甲 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N7/01 |
| 代理公司： | 东营双桥专利代理有限责任公司 37107 | 代理人： | 刘东亮 |
| 地址： | 730050 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 抑制 牦牛 rxfp2 基因 表达 shrna 病毒 及其 构建 方法 用途 | ||
【权利要求书】：
1.shRNA在用于制备抑制牦牛RXFP2基因表达的试剂中的用途，其特征在于，所述的shRNA包括一对序列如下所示的shRNA：上游序列是SEQ ID NO.7，下游序列是SEQ ID NO.8；
所述的用途中，shRNA插入于载体上，所述的载体是指hU6-MCS-CMV-ZsGreen1-PGK-Puro质粒；所述的shRNA是通过为BamH I和EcoR I酶切位点插入在质粒中；
所述的用途中还包括构建抑制牦牛RXFP2基因表达的慢病毒的步骤，包括：将上述的载体与psPAX2和pMD2.G共转染到宿主细胞培养；所述的宿主细胞是293T；
所述的hU6-MCS-CMV-ZsGreen1-PGK-Puro质粒的结构是由依次连接的CMV启动子、ZsGreen1基因、PGK启动子、Puromycin抗性基因、WPRE元件、3’LTR元件、PUC复制原点、AMP抗性基因、AMP启动子、5’LTR、Packaging signal序列、CPPT元件、hU6启动子所构成；并且，在hU6基因和CMV启动子有酶切位点BamH I和EcoR I。
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