[发明专利]大鼠脑血浆和脑组织中维格列汀衍生物的检测方法

权利要求书

1.一种大鼠血浆和脑组织中维格列汀衍生物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、标准品溶液的配制；

步骤二、除脑组织样品中的蛋白质；

步骤三、、除血浆样品中的蛋白质

步骤四、HPLC-UV测定大鼠脑组织和血浆样品中CMD-05；

步骤五、结果计算。

2.如权利要求1所述的大鼠脑组织和血浆中CMD-05的检测方法，其特征在于，步骤一中对标准品溶液的配制具体方法为：

取CMD-05标准品和内标卡马西平各10.0mg标准品，分别用乙腈配制成浓度为1.0mg.mL^-1的储备液，放置-20℃保存备用。

3.如权利要求1所述的大鼠脑组织和血浆中CMD-05的检测方法，其特征在于，步骤二中对脑组织样品的除蛋白的具体方法为：

步骤a、SD大鼠断头取血并离心取上清液保存于-80℃，并在冰盒上迅速分离出脑组织保存于-80℃；

步骤b、脑组织称重并剪碎，加入内标溶液50μL(含内标2.00μg.mL^-1)，脑组织加1:2倍(m/v)体积的乙腈于玻璃匀浆器中匀浆。匀浆液于12000×g，4℃条件下离心15min。取上清液50μL直接进样分析。

4.如权利要求1所述的大鼠血浆中高半胱氨酸和半胱氨酸的检测方法，其特征在于，步骤三中除血浆样品中蛋白质的具体方法为：

取血浆100μL，加入内标溶液50μL(含内标2.00μg.mL^-1)，加入150μL乙腈,涡旋1.0min后于12000×g,4℃条件下离心15min。取上清液50μL直接进样分析。

5.如权利要求1所述的大鼠脑组织和血浆中CMD-05的检测方法，其特征在于，步骤四中HPLC-UV测定大鼠脑组织和血浆样品中CMD-05，测定条件如下：

检测器：岛津DAD二极管阵列检测器；

色谱柱：C₁₈柱(Phecda,250mm×4.5mm,5μm)；

保护柱：安捷伦C₁₈柱(Agilent,40mm×3.0mm,5μm)；

流动相A：乙腈

流动相B：10mmoL.L^-1乙酸铵，10％冰醋酸调pH至6.0，

等度洗脱，洗脱程序为：A:B＝37:63；

柱温：30℃；

流速：1.0mL.min^-1；

检测波长：204nm；

进样量：50μL。

6.如权利要求1所述的大鼠脑组织和血浆中CMD-05的检测方法，其特征在于，步骤五中结果计算具体为：

按公式(1)计算脑组织样品中CMD-05的含量；按公式(2)计算血浆样品中CMD-05的含量；

Y＝0.325X-0.0125 (1)

Y＝0.5267X-0.0796 (2)

式中：

Y：待测物与内标物质的峰面积之比；

X：待测物的浓度，单位为微克每毫升。