[发明专利]大鼠脑血浆和脑组织中维格列汀衍生物的检测方法

说明书

本发明公开了一种大鼠血浆和脑组织中维格列汀衍生物的检测方法，包括以下步骤：步骤一、标准品的配制；步骤二、除脑组织和血浆样品中的蛋白质；步骤三、除血浆样品中的蛋白质；步骤四、HPLC‑UV测定大鼠脑组织和血浆样品中CMD‑05；步骤五、结果计算。本发明提供的大鼠脑组织和血浆中CMD‑05检测方法具有步骤简便、准确度和灵敏度好的优点，可实现样品中CMD‑05的快速检测。

技术领域

本发明涉及医药化学检测领域，更具体地说，本发明涉及一种大大鼠体内维格列汀衍生物的检测方法。

背景技术

二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidase IV，DPP-IV)是一类跨膜丝氨酸蛋白酶，但凡N端第二位有脯氨酸或丙氨酸的多肽都可作为该酶的底物，它能从肽链N端水解2个氨基酸残基，进而使多肽失活，是体内外促进胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽(GIP)降解和失活的关键酶之一。

维格列汀是一种高选择性的DPP-IV底物抑制剂，通过DDP-IV形成可逆的共价键而紧密结合，缓慢解离，解离时间达到了55min，因而可以更为强效的抑制DDP-IV的活性。DPP-IV抑制剂与DPP-IV的结合存在着几个关键位点：1.酶上的疏水性S1口袋，2.酶侧链的谷氨酸205、206，3.酶侧链的丝氨酸630。目前大部分的DPP-IV抑制剂均是围绕这3方面设计。吡咯烷类具有较好的化学稳定性，吡咯烷环能与DPP-Ⅳ疏水性S1口袋的结合是对底物保持亲和力的关键。作为维格列汀(Vildagliptin)的衍生物(CMD-05)同样具有降血糖作用，其化学结构式见图1。在维格列汀的基础上，其在P2位的N上被衍生化形成酰基，极性降低，脂溶性增强，更有可能通过血脑屏障。因此本文建立了一种分离测定CMD-05的高效液相色谱法。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测大鼠脑组织和血浆中维格列汀衍生物(CMD-05)的方法。

为了实现根据本发明的这些目的，提供了一种大鼠脑组织和血浆中维格列汀衍生物(CMD-05)的检测方法，包括以下步骤：

步骤一、标准品溶液的配制；

步骤二、除脑组织浆样品中的蛋白质；

步骤三、、除血浆样品中的蛋白质

步骤四、HPLC-UV测定大鼠脑组织和血浆样品中CMD-05；

步骤五、结果计算。

优选的是，步骤一中对标准品溶液的配制具体方法为：

取CMD-05和内标卡马西平各10.0mg标准品，分别用乙腈配制成浓度为1.0mg.mL^-1的储备液，放置-20℃保存备用；

优选的是，步骤二中除脑组织中的蛋白质具体方法为：

步骤a、SD大鼠断头取血并离心取上清液保存于-80℃，并在冰盒上迅速分离出脑组织保存于-80℃；

步骤b、脑组织称重并剪碎，加入内标溶液50μL(含内标2.00μg.mL^-1)，脑组织加1:2倍(m/v)体积的乙腈于玻璃匀浆器中匀浆。匀浆液于12000×g,4℃条件下离心15min。取上清液50μL直接进样分析。

优选的是，步骤三中除血浆样品中蛋白质的具体方法为：

取血浆100μL，加入内标溶液50μL(含内标2.00μg.mL^-1)，加入150μL乙腈,涡旋1.0min后于12000×g,4℃条件下离心15min。取上清液50μL直接进样分析。

优选的是，步骤四中HPLC-UV测定大鼠脑组织和血浆样品中CMD-05，测定条件如下：

检测器：岛津DAD二极管阵列检测器；