[发明专利]一种组织工程化体外三维口腔黏膜实验模型

说明书

本发明涉及到一种组织工程化体外三维口腔黏膜实验模型，主要包括以下步骤：步骤1：提取小鼠肉瘤细胞中的外基质蛋白做细胞支架；步骤2：将成纤维及上皮细胞分批种植于细胞支架中；步骤3：将步骤2中的基质胶与细胞混合物分批置于Transwell上室和下室中；步骤4：向Transwell上室、下室分别添加上皮专用培养基和普通的DMEM培养基；步骤5：利用气液平面形成角化上皮层，完成体外三维口腔黏膜的建模。既能够形成稳定的细胞分布均匀的体外口腔黏膜模型，且该模型具有良好的可复制性及稳定性，另外降低了建模的技术敏感性，简化了培养材料的种类，节约了资金，缩短了建模周期。

技术领域

本发明涉及一种实验模型，特别涉及一种组织工程化体外三维口腔黏膜实验模型。

背景技术

口腔粘膜是覆盖在口腔表面的粘膜，组织学上由上皮和固有层组成，并借粘膜下层与深部组织相连。口腔粘膜的前方与唇部皮肤相连，后面与咽部粘膜相延续，是消化道的最前端，因此其结构和功能具有皮肤和消化道粘膜的某些特点。口腔粘膜的上皮为复层扁平上皮，除少数部位的皮脂腺外，没有其他的皮肤附属器。口腔粘膜的主要功能是屏障保护功能和感觉功能。不同部位口腔粘膜的形态与结构依其功能特点而有所差异。

当在进行口腔黏膜实验时，为了便于实验和观察，往往会建立口腔黏膜体外三维培养模型，方法为分别培养牙龈上皮细胞及成纤维细胞备用，胶原溶液与成纤维细胞按比例混合后置于Transwell小室培养两天或，于胶原-细胞混合体表面接种上皮细胞，共同增殖培养三天后，升至液气平面继续培养十天，可得三维模型的组织学结构。但这种方式步骤繁琐。且复制率不高、材料复杂、技术敏感性高、成本高昂，不利于大样本实验研究，并且整个建模周期花费时间较长。

因而在此我们提供一种制备步骤简单的体外三维口腔黏膜实验模型。

发明内容

本发明的目的是提供一种组织工程化体外三维口腔黏膜实验模型。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种组织工程化体外三维口腔黏膜实验模型，主要包括以下步骤：

步骤1：提取小鼠肉瘤细胞中的外基质蛋白做细胞支架；

步骤2：将成纤维及上皮细胞分批种植于细胞支架中；

步骤3：将步骤2中的基质胶与细胞混合物分批置于Transwell上室和下室中；

步骤4：向Transwell上室、下室分别添加上皮专用培养基和普通的DMEM培养基；

步骤5：利用气液平面形成角化上皮层，完成体外三维口腔黏膜的建模。

作为优选，所述步骤4中，分别添加培养基和普通的DMEM培养基后放置在细胞培养箱中培养6-8天。

作为优选，所述步骤5中，放置5-7天后形成角化上皮层。

作为优选，将步骤5中形成的口腔黏膜模型用刀片从Transwell上室上切下，并使其吸附在玻片上，完整保存。

作为优选，将吸附在玻片上完整保存的口腔黏膜模型依次经过脱水、浸蜡后包埋。

作为优选，预先将基质胶与培养基在冰面上以体积比1:1混合形成支架材料，再与小鼠肉瘤细胞中的外基质蛋白一同形成细胞支架。

作为优选，所述步骤2中的成纤维细胞密度为1.2x106/孔。

综上所述，本发明具有以下有益效果：

1.能够形成稳定的细胞分布均匀的体外口腔黏膜模型；

2.提高了该模型的可复制性及模型的稳定性；

3.降低了建模的技术敏感性，简化了培养材料的种类，节约了资金；

4.缩短了建模周期。