[发明专利]一种高效液相色谱法分离测定度他雄胺软胶囊中度他雄胺及有关物质的方法

说明书

本发明公开了一种高效液相色谱法分离测定度他雄胺软胶囊中度他雄胺及有关物质的方法,其特征是采用氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以正己烷‑异丙醇‑乙腈‑冰醋酸为流动相进行洗脱，用于分离测定度他雄胺软胶囊中度他雄胺及有关物质。本方法能够有效分离度他雄胺软胶囊中度他雄胺和杂质A和/或E和/或N，可以同时对其中的一种或多种有关物质进行分离测定，与现有技术相比，提高了分离测定的效率，具有重复性好、专属性强和灵敏度高等特点。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及高效液相色谱法、流动相及高效液相色谱法分离测定度他雄胺软胶囊中度他雄胺及有关物质的方法。

背景技术

度他雄胺(dutasteride)是第2代5α还原酶抑制药,是目前第一种也是唯一一种同时抑制Ⅰ型和Ⅱ型5α还原酶的药物,由葛兰素公司研究开发,2002年10月10日由美国食品与药品管理局(FDA)批准在美国上市。度他雄胺是合成4氮杂类甾醇化合物,为细胞内酶。分子式为C27H3OF6N2O2,分子量为5285。度他雄胺为白色至淡黄色粉末,熔点为242～250℃,不溶于水,溶于乙醇(44mg·mL1),甲醇(64mg·mL1),聚乙二醇400(3mg·mL1)。

度他雄胺软胶囊，治疗良性前列腺增生症(BPH)的中、重度症状。用于中、重度症状的良性前列腺增生症患者，降低急性尿潴留(AUR)和手术的风险。

合成的度他雄胺粗品主要含有少量的度他雄胺杂质,其中,包含杂质A、B、E、M、N。因此,可采用主成分自身对照法计算杂质含量。但现有的高效液相色谱法均无法很好的分离测定度他雄胺软胶囊中度他雄胺及有关物质。

比如，度他雄胺软胶囊进口注册质量标准(JX20130056)中收录了有关物质方法，以氰基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，流动相为正己烷：异丙醇＝90：10，流速为1.0ml/min，柱温为15℃，检测波长为240nm，供试品浓度为20μg/ml，进样体积为50μl。但根据进口注册质量标准的方法，空白辅料会干扰杂质的检测。同样，EP9.4和USP41质量标准中同样收录了有关物质方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，流动相为乙腈-水-三氟乙酸(52:48:0.25)，流速为1.0ml/min，柱温为35℃，检测波长为220nm，供试品浓度为500μg/ml，进样体积为20μl。根据EP9.4和USP41的检测方法，空白辅料干扰峰特别多，干扰杂质的检测，并且空白辅料峰在等度条件下无法完全洗脱，会干扰下一针测试。

鉴于现有的质量标准检测方法会导致空白辅料干扰峰特别多，杂质与杂质之间不能很好的分开，空白辅料会干扰杂质A和/或杂质E和/或杂质N的分离测定，无法更好的有效分离测定他雄胺软胶囊中度他雄胺及有关物质以及更好的质量研究。因此，寻找一种重复性好、专属性强和灵敏度高的分离测定他雄胺软胶囊中度他雄胺及有关物质的高效液相色谱法很有必要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一是提供一种高效液相色谱法分离测定度他雄胺软胶囊中度他雄胺及有关物质的方法，该流动相和方法适用于度他雄胺和相关杂质A，和/或杂质E，和/或杂质N的分离测定，可同时实现度他雄胺软胶囊中度他雄胺和杂质A，和/或杂质E，和/或杂质N的分离测定，提高了分离测定的效率，有利于对度他雄胺胶囊的质量监测。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种高效液相色谱法分离测定度他雄胺软胶囊中度他雄胺及有关物质的方法，所述高效液相色谱法分析过程中采用的色谱柱是以氰基硅烷键合硅胶为填充剂，以正己烷-异丙醇-乙腈-冰醋酸为流动相进行洗脱。

本发明所述的方法适用于度他雄胺相关杂质A，和/或杂质E，和/或杂质N的分离测定，可用于单独检测其中一种物质，也可同时分离测定这4中物质，与现有技术相比，本发明的方法检测结果受干扰少、重复性更好、专属性更强和灵敏度更高。