[发明专利]一种植物多糖及用于促进猪卵母细胞体外成熟的用途

说明书

本发明公开了一种植物多糖及用于促进猪卵母细胞体外成熟的用途。本发明提供的纯化多糖A、B、D、E、F均一性较好，经HPGPC检测均只含一个主要的色谱峰，峰型对称且较窄；纯化多糖A、B、D、E、F对体外培养的猪卵母细胞具有显著的促进成熟作用，可以用于体外诱导猪卵母细胞成熟。

技术领域

本发明属于畜牧领域，涉及一种植物多糖及用于促进猪卵母细胞体外成熟的用途。

背景技术

水菖蒲Acorus calamus为天南星科Araceae多年水生草本植物，别名菖蒲，臭菖蒲，白菖蒲等。以根茎入药，具有开窍，化痰，健胃，益智，散风，活血等功效。生于海拔2600m以下的水边、沼泽湿地或湖泊浮岛上，在南北两半球的温带、亚热带，与我国各省均有分布。

卵母细胞体外成熟是胚胎体外生产过程的关键环节，因为它决定卵母细胞的质量，影响胚胎的发育。通过在培养液中添加激素、细胞因子或生长因子等促进卵母细胞成熟已取得一定进展，但是体外成熟的卵母细胞的发育能力仍然不及体内成熟的卵母细胞，这说明卵母细胞的体外成熟体系还不完善，仍需要进一步优化。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种植物多糖及用于促进猪卵母细胞体外成熟的用途。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

一种多糖，通过如下方法制备得到：

S1、粗多糖的提取

将干燥的水菖蒲Acorus calamus根茎粉碎，热水沸腾提取，提取液过滤，滤液浓缩至1/5体积，以Sevag法除蛋白，离心去除中间有机相与水相交界处乳化层，合并上清液，加入无水乙醇沉淀多糖，静置，离心收集沉淀，用蒸馏水复溶、冷冻干燥得粗多糖；

S2、粗多糖的初步纯化

准确称取100mg上述麦胚粗多糖冻干粉充分溶解于10mL无菌水中，将配好的粗多糖溶液全部滴加上样至DEAE-Sepharose Fast Flow(3.6cm×20cm)纤维素阴离子交换层析柱中，依次用0，0.1mol/L的NaCl溶液分别洗脱10个柱体积，洗脱的流速为1.2mL/min，收集0.1mol/L的NaCl溶液洗脱液，冷冻干燥得到初步纯化多糖；

S3、初步纯化多糖的进一步纯化

称取0.1mol/L NaCl溶液洗脱得到的初步纯化多糖25mg，用5mL超纯水溶解，然后上样至SephacrylS-200HR凝胶柱，凝胶柱内径为2cm，柱床高度为75cm，用蒸馏水洗脱，洗脱的流速为0.4mL/min，收集第4～5个柱体积洗脱液，冷冻干燥得到纯化多糖。

优选地，步骤S1固液比为1:5。

优选地，步骤S1提取3次，每次2h。

优选地，步骤S1以Sevag法除蛋白，3000r/min离心10min去除中间有机相与水相交界处乳化层。

优选地，步骤S1加入4倍体积无水乙醇沉淀多糖。

优选地，步骤S1加无水乙醇后于4℃静置24h。

优选地，步骤S1加无水乙醇静置后以3000r/min离心10min收集沉淀。

上述多糖用于促进猪卵母细胞体外成熟的用途。

有益效果：

本发明提供的纯化多糖A、B、D、E、F均一性较好，经HPGPC检测均只含一个主要的色谱峰，峰型对称且较窄；纯化多糖A、B、D、E、F对体外培养的猪卵母细胞具有显著的促进成熟作用，可以用于体外诱导猪卵母细胞成熟。

附图说明

图1为纯化多糖A的HPGPC图；