[发明专利]一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法

权利要求书

1.一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤： （1）将纳米磁珠用PBS缓冲液洗涤3次后，加入到碳化的二亚胺盐酸盐的PBS溶液中，超声分散均匀后加入抗体以及多肽后，室温下50-100rpm/min条件下震荡1-2小时后磁分离后得到含有抗体的磁珠，并用PBS溶液洗涤2-3次后，将含有抗体的磁珠均匀分散于PBS溶液中制备免疫磁珠；

（2）将量子点与适配体混合后，用PBS缓冲液定容后，在室温下，50-100rpm/min条件下孵育30min后，得量子点-适配体交联物，并储存于４℃冰箱保存备用；

（3）将5g的巧克力饼干与15-20mL的25-40的%乙腈-水混合液混合后，35-50℃条件下超声提取20-30min后离心，取上清液浓缩后，利用PBS缓冲液将浓缩液稀释到10mL后制备得到巧克力饼干样品溶液；

（4）将免疫磁珠、量子点-适配体交联物以及巧克力饼干样品溶液混合后，在室温下震荡2-3小时后磁分离沉淀后，并用PBS溶液洗涤沉淀2-3次后，将沉淀均匀分散于PBS溶液后，取300μL用激光诱导荧光仪检测荧光值。

2.根据权利要求1所述的一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法，其特征在于步骤（1）中所述的磁珠为亲水性磁珠，其粒径不大于200nm。

3.根据权利要求1所述的一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法，其特征在于步骤（1）中所述的碳化的二亚胺盐酸盐的PBS溶液中碳化的二亚胺盐酸盐浓度为0.05-0.1g/mL。

4.根据权利要求1所述的一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法，其特征在于步骤（1）中所述的抗体为金黄色葡萄球菌多克隆抗体、单增李斯特菌多克隆抗体、大肠杆菌单克隆抗体中的一种，其加入量为磁珠的2-4%；所述的多肽为H8多肽，其序列为WHSGTPHN，加入量为磁珠0.5-1%。

5.根据权利要求1所述的一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法，其特征在于步骤（2）中所述的量子点为CdSe量子点、CdSe/ZnS量子中的一种。

6.根据权利要求1所述的一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法，其特征在于步骤（2）中所述的适配体为链酶亲和素、抗体的PBS溶液，其浓度均为1mg/mL；其中链酶亲和素为金黄色葡萄球菌链酶亲和素、单增李斯特菌链酶亲和素、大肠杆菌中的一种；所述的抗体为金黄色葡萄球菌多克隆抗体、单增李斯特菌多克隆抗体、大肠杆菌单克隆抗体中的一种。

7.根据权利要求1所述的一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法，其特征在于步骤（3）中所述的浓缩后的浓缩液的体积为0.4-0.5mL。

8.根据权利要求1所述的一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法，其特征在于步骤（3）中所述的免疫磁珠、量子点-适配体交联物以及巧克力饼干样品溶液混合时免疫磁珠的加入量为10-20mg,量子点-适配体交联物为1.5-2mL,巧克力饼干样品溶液的加入量为2-3mL。