[发明专利]一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法

说明书

本发明涉及一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法。本发明首先将致病菌的抗体嫁接于纳米磁珠上制备免疫磁珠；然后将适配体与量子点进行交联制备得量子点‑适配体交联物；将巧克力饼干用乙腈‑水混合液提取后制备得到巧克力饼干样品溶液；最后将免疫磁珠、量子点‑适配体交联物以及巧克力饼干样品溶液混合后，经孵育，磁分离，PBS溶液洗涤后用激光诱导荧光仪检测荧光值测量致病菌的浓度。本发明的检测方法结合了量子点的优势，巧妙地避免了对于细菌表面抗原位点的竞争性结合，提高多种目标检测灵敏度和速度、降低噪音、减少样本用量，能降低检测费用。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，具体为一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法。

背景技术

巧克力饼干是一种童年小零食，主要由巧克力浆，植物油、砂糖、淀粉、牛奶粉、麦芽、饼干粒等组成，由于其美味口感以及可爱的造型深受小孩子的喜欢。因其营养丰富，存在被细菌感染的威胁，因而影响巧克力饼干的质量。近年来，由病原微生物引起的食源性食物中毒事件，无论是发达国家还是发展中国家，其报道均屡见不鲜。因此，检测巧克力饼干中的致病菌对控制巧克力饼干的质量安全具有重要的作用。

在食源性致病微生物分析工作中，由于食品样本是一个非常复杂的体系，组分繁多，目标致病菌常常不是优势物种，样品中不仅含有多种非生物杂质，还含有多种非目标微生物，将会严重干扰目标病源微生物的检测；另一方面，食品样中，病源微生物的含量往往较低，无法进行直接检测，通常需要对样品进行浓缩、富集等处理，但浓缩后会加剧干扰物质对检测的影响。因此，要对食品样本中的目标菌进行针对性的检测，其样品前处量子点作为一种新型的荧光探针，以其优良的荧光性能为食源致病菌的快速检测开启了一扇新的大门。量子点荧光探针激发光谱宽，发射光谱窄，荧光强度大，稳定性好；发射光谱可以通过量子点的尺寸来控制。采用量子点荧光检测技术能够大幅缩短检测时间，检测极限低，节省人力物力。基于此，开发巧克力饼干中致病菌的量子点荧光探针技术将具有重要的意义。

发明内容

为了解决巧克力饼干中致病菌检测时致病菌含量低，干扰大的问题，一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法。

为了实现上述目标。本发明将采用以下技术：

一种巧克力饼干中致病菌的量子点荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将纳米磁珠用PBS缓冲液洗涤3次后，加入到碳化的二亚胺盐酸盐的PBS溶液中，超声分散均匀后加入抗体以及多肽后，室温下50-100rpm/min条件下震荡1-2小时后磁分离后得到含有抗体的磁珠，并用PBS溶液洗涤2-3次后，将含有抗体的磁珠均匀分散于PBS溶液中制备免疫磁珠；

（2）将量子点与适配体混合后，用PBS缓冲液定容后，在室温下，50-100rpm/min条件下孵育30min后，得量子点-适配体交联物，并储存于４℃冰箱保存备用；

（3）将5g的巧克力饼干与15-20mL的25-40的%乙腈-水混合液混合后，35-50℃条件下超声提取20-30min后离心，取上清液浓缩后，利用PBS缓冲液将浓缩液稀释到10mL后制备得到巧克力饼干样品溶液；

（4）将免疫磁珠、量子点-适配体交联物以及巧克力饼干样品溶液混合后，在室温下震荡2-3小时后磁分离沉淀后，并用PBS溶液洗涤沉淀2-3次后，将沉淀均匀分散于PBS溶液后，取300μL用激光诱导荧光仪检测荧光值。

进一步的，步骤（1）中所述的磁珠为亲水性磁珠，其粒径不大于200nm。

进一步的，步骤（1）中所述的碳化的二亚胺盐酸盐的PBS溶液中碳化的二亚胺盐酸盐浓度为0.05-0.1g/mL。

进一步的，步骤（1）中所述的抗体为金黄色葡萄球菌多克隆抗体、单增李斯特菌多克隆抗体、大肠杆菌单克隆抗体中的一种，其加入量为磁珠的2-4%；所述的多肽为H8多肽，其序列为WHSGTPHN，加入量为磁珠0.5-1%。