[发明专利]人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法

权利要求书

1.人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，其特征在于，所述分离鉴定方法包括以下步骤：

将人髌前脂肪垫组织用酶液消化、过滤和离心得到脂肪垫细胞；

将所述脂肪垫细胞接种于培养皿进行培养，所述脂肪垫细胞覆盖所述培养皿达到76％-82％时，用酶消化并计数，得到酶消化细胞；

将所述酶消化细胞接种于培养基，培养并计数，得到脂肪垫干细胞并进行流式表型鉴定；

用诱导培养基诱导培养所述脂肪垫干细胞，并进行鉴定分析。

2.根据权利要求1所述的人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，其特征在于，所述酶液为0.1％的I型胶原酶液。

3.根据权利要求1所述的人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，其特征在于，所述过滤选用80-140目筛进行。

4.根据权利要求1所述的人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，其特征在于，所述离心的转速为1300rpm，时间为5-8min。

5.根据权利要求1所述的人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，其特征在于，所述脂肪垫细胞覆盖所述培养皿达到76％-82％前，包括更换培养基，在接种所述脂肪垫细胞后22-27h更换培养基，然后每三天更换一次培养基。

6.根据权利要求1所述的人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，其特征在于，所述酶为胰酶。

7.根据权利要求5所述的人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，其特征在于，所述酶消化细胞的接种密度为3×10³-7×10³个/接种孔。

8.根据权利要求1所述的人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，其特征在于，所述流式表型鉴定包括将所述脂肪垫干细胞稀释分装于添加有表面分子标记的流式管，然后加入荧光抗体混合，避光孵育，加入PBS缓冲液混合后离心取上清，重新加入PBS缓冲液重悬并流式分析。

9.根据权利要求8所述的人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，其特征在于，所述表面分子标记CD11b-PE-cy5、CD19-FITC、CD29-APC、CD34-APC、CD44-FITC、CD45-PE-cy5、CD71-APC、CD73-PE、CD90-PE、CD105-PE和HLA-DR-PE。

10.根据权利要求1所述的人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，其特征在于，所述诱导培养鉴定分析包括成骨诱导及茜素红染色分析、成脂诱导及油红染色分析、成软骨诱导及阿利辛蓝染色分析以及成骨诱导基因的表达分析。