[发明专利]人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法

说明书

本发明提供了人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，属于干细胞技术领域。本发明提供的人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，通过酶处理得到脂肪垫细胞，表型鉴定后通过诱导培养，进行对细胞的干性的鉴定，得到人髌前脂肪垫干细胞，满足干细胞的相关特性，未来可作为细胞模型应用于多种不同实验。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，具体而言，涉及人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells)因具有强大的自我更新、多向分化及跨胚层发育的可塑性，在组织工程的构建及基因治疗方面具有巨大的发展潜力。

目前对髌前脂肪垫干细胞的研究好较少，对脂肪垫干细胞的分离、培养和鉴定方法还不够完善，因此脂肪垫干细胞不能作为细胞模型进行科学研究，所以需要尽快的发展脂肪垫干细胞的分离、培养和鉴定方法。

发明内容

本发明的目的在于提供人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，提供一种稳定可靠的人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，验证脂肪垫干细胞的可靠性。

为了实现本发明的上述目的，采用以下技术方案：

人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，分离鉴定方法包括以下步骤：

将人髌前脂肪垫组织用酶液消化、过滤和离心得到脂肪垫细胞；

将脂肪垫细胞接种于培养皿进行培养，脂肪垫细胞覆盖培养皿达到76％-82％时，用酶消化并计数，得到酶消化细胞；

将酶消化细胞接种于培养基，培养并计数，得到脂肪垫干细胞并流式进行表型鉴定和诱导培养鉴定分析。

与现有技术相比较，本发明的有益效果包括：本发明提供的人髌前脂肪垫干细胞的分离鉴定方法，通过酶处理得到脂肪垫细胞，表型鉴定后通过诱导培养，进行对细胞的干性的鉴定，得到人髌前脂肪垫干细胞，满足干细胞的相关特性，未来可作为细胞模型应用于多种不同实验。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实验例提供的脂肪垫干细胞显微结果示意图；

图2为本发明实验例提供的细胞生长曲线结果图；

图3为本发明实验例提供的流式表型分析图；

图4为本发明实验例提供的流式表型分析图；

图5为本发明实验例提供的流式表型分析图；

图6为本发明实验例提供的CD19和CD44标记的流式表型分析图；

图7为本发明实验例提供的CD73和CD90标记的流式表型分析图；

图8为本发明实验例提供的CD105和anti-HLA-DR标记的流式表型分析图；

图9为本发明实验例提供的CD11b和CD45标记的流式表型分析图；

图10为本发明实验例提供的CD29和CD34标记的流式表型分析图；

图11为本发明实验例提供的CD71标记的流式表型分析图；

图12为本发明实验例提供的成骨分化显微结果示意图；

图13为本发明实验例提供的成脂分化显微结果示意图；

图14为本发明实验例提供的成软骨分化显微结果示意图；