[发明专利]烟草NtPED基因在调控烟草叶柄夹角中的应用

说明书

本发明提出一种烟草NtPED基因在调控烟草叶柄夹角中的应用，属于基因工程技术领域，能够有效调控烟草叶柄与茎间的角度，可有效改善其农艺性状，从而有助于提高烟草的产量和品质。该技术方案包括利用烟草NtPED基因克隆得到烟草叶柄调控基因，通过过量表达所述烟草叶柄调控基因降低烟草叶柄与茎间的角度；利用基因编辑技术获得烟草NtPED基因的功能缺失的基因编辑载体而增大烟草叶柄与茎间的角度。本发明能够应用于烟草叶柄与茎间角度的调控中。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种烟草NtPED基因在调控烟草叶柄夹角中的应用。

背景技术

叶柄与茎秆间角度的大小影响到作物对光、气的竞争。叶柄角度小，光合面积不大，群体光合效率降低，导致减产；相反，叶柄角度开合过大，又影响行间距，不利用作物合理密植。因此，叶柄夹角、烟株株形等重要农艺性状最终可影响作物产量。此外，作为重要的经济作物，烟草叶片是其主要收获的器官，合适的叶柄夹角有助于烟株获得理想株形，提高烟草品质、产量，从而能够帮助烟草生物量和经济系数都达到最高水平。因此，如何有效调控影响株形的因素并将其有效利用，这对烟草产量、品质的提高将具有重要指导意义。

发明内容

本发明提出一种烟草NtPED基因在调控烟草叶柄夹角中的应用，能够有效调控烟草叶柄与茎间的角度，可有效改善其农艺性状，从而有助于提高烟草的产量和品质。

为了达到上述目的，本发明烟草NtPED基因在调控烟草叶柄夹角中的应用，包括以下步骤：

利用烟草NtPED基因克隆得到烟草叶柄调控基因，通过过量表达所述烟草叶柄调控基因降低烟草叶柄与茎间的角度；

利用基因编辑技术获得烟草NtPED基因的功能缺失的基因编辑载体而增大烟草叶柄与茎间的角度。

作为优选，利用烟草NtPED基因克隆得到烟草叶柄调控基因包括以下步骤：

设计特异克隆烟草NtPED基因的如SEQ ID NO.1所示的第一正向引物和如SEQ IDNO.2所示第一反向引物；

提取烟草叶片RNA并反转录为cDNA，以此为模板，利用所述第一正向引物和第一反向引物进行第一次PCR扩增；

以上述第一次PCR扩增产物稀释50倍为模板，利用如SEQ ID NO.3所示第二正向引物和如SEQ ID NO.4所示第二反向引物进行第二次PCR扩增；

将上述第二次PCR扩增的产物片段切胶回收后，通过BP反应连接到gateway中间载体pDonor207上，并将所得产物转化进入大肠杆菌DH5a中，鉴定获得烟草叶柄调控基因，命名为NtPED-pDonor207，具有如SEQ ID NO.5所示序列。

作为优选，所述引物分别为：

第一正向引物：TACAAAAAAGCAGGCTTCATGGAGGAAGATTGGGATCT，和

第一反向引物：GTACAAGAAAGCTGGGTCACTACCGCCAGCCGCCGTA；

第二正向引物：GTGGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTC，和

第二反向引物：GTGGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTC。

作为优选，第一次PCR扩增和第二次PCR扩增的扩增条件为：95℃5min；33个如下循环：95℃30s、58℃30s、72℃1min；72℃10min。

作为优选，利用基因编辑技术获得烟草NtPED基因的功能缺失的基因编辑载体包括以下步骤：