[发明专利]一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法在审
申请号: | 201811057297.X | 申请日: | 2018-09-11 |
公开(公告)号: | CN109369817A | 公开(公告)日: | 2019-02-22 |
发明(设计)人: | 邢晓丹 | 申请(专利权)人: | 浦江县昂宝生物技术有限公司 |
主分类号: | C08B37/00 | 分类号: | C08B37/00 |
代理公司: | 北京国翰知识产权代理事务所(普通合伙) 11696 | 代理人: | 卫翠婷 |
地址: | 322200 浙江省*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 大孔树脂纯化 抗衰老 洗脱液 透析 离子交换层析 大孔树脂 洗脱峰 凝胶色谱柱 多糖溶液 提取效率 粗多糖 高活性 抗老化 氯甲基 凝胶柱 浓缩液 吸附量 醇沉 粗品 得率 上样 浓缩 | ||
1.一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法,包括大孔树脂纯化、离子交换层析、透析和凝胶色谱柱纯化,其特征在于:所述大孔树脂纯化步骤用大孔树脂为D3520-Cl。
2.根据权利要求1所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法,其特征在于:所述D3520-Cl的制备步骤为:将大孔树脂D3520用乙醇溶液溶胀5-6h,随后用乙醇溶液清洗2-4遍后自然风干,然后置于60-70℃的CCl4中溶胀30-40h,再加入ZnCl2、柠檬酸铁、NaCl以及氯甲醚,在温度为45-55℃、超声功率为70-80W的条件下反应16-20h,即得D3520-Cl。
3.根据权利要求2所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法,其特征在于:所述D3520和CCl4的固液比为1:3.5-4.0(g/mL)。
4.根据权利要求2所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法,其特征在于:所述D3520、ZnCl2、NaCl和氯甲醚的重量比为1:1.3-1.5:0.40-0.42:0.15-0.17。
5.根据权利要求2所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法,其特征在于:所述ZnCl2和柠檬酸铁摩尔比为1:0.12-0.13。
6.根据权利要求1所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法,其特征在于:所述大孔树脂纯化步骤为:将抗衰老粗多糖调配成浓度3-5mg/mL的溶液,上样至大孔树脂D3520-Cl柱进行纯化,用去离子水进行洗脱,将收集的洗脱液减压浓缩至粘稠状态,再向浓缩液中加乙醇溶液,混合均匀,沉淀过夜,离心,干燥,备用。
7. 根据权利要求1所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法,其特征在于:所述离子交换层析步骤为:将大孔树脂纯化后的多糖用去离子水配成浓度18-22mg/mL的溶液,上样至DEAE Sepharose CL-6B柱进行离子交换层析纯化,分别用0mol/L、0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L、0.7mol/L的氯化钠溶液进行梯度洗脱,洗脱体积为3-4BV,流速为0.7-0.8mL/min,采用苯酚-硫酸法跟踪检测多糖含量,样品直到没有SFPS可以检出就可以,绘制洗脱曲线,分别收集各洗脱峰区间的洗脱液。
8.根据权利要求1所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法,其特征在于:所述透析步骤为:将离子交换层析后的洗脱液用截留分子量为3000-4000Da透析袋透析至袋外溶液的电导率与去离子水的电导率相同,透析液冷冻干燥。
9. 根据权利要求1所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法,其特征在于:所述凝胶色谱柱纯化步骤为:将透析得到的多糖粗品配成浓度38-42mg/mL的溶液,分别上样至Sephadex G-200凝胶柱进一步纯化,用蒸馏水进行洗脱,通过紫外-可见分光光度计跟踪检验其在480nm处的吸光度,分别以洗脱液的体积和吸光度为横纵坐标绘制洗脱曲线,收集各洗脱峰区域的洗脱液,选择抗老化效果最好的组分,浓缩至小体积,冷冻干燥,即得抗衰老多糖。
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