[发明专利]一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法

权利要求书

1.一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法，包括大孔树脂纯化、离子交换层析、透析和凝胶色谱柱纯化，其特征在于：所述大孔树脂纯化步骤用大孔树脂为D3520-Cl。

2.根据权利要求1所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法，其特征在于：所述D3520-Cl的制备步骤为：将大孔树脂D3520用乙醇溶液溶胀5-6h，随后用乙醇溶液清洗2-4遍后自然风干，然后置于60-70℃的CCl₄中溶胀30-40h，再加入ZnCl₂、柠檬酸铁、NaCl以及氯甲醚，在温度为45-55℃、超声功率为70-80W的条件下反应16-20h，即得D3520-Cl。

3.根据权利要求2所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法，其特征在于：所述D3520和CCl₄的固液比为1:3.5-4.0（g/mL）。

4.根据权利要求2所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法，其特征在于：所述D3520、ZnCl₂、NaCl和氯甲醚的重量比为1:1.3-1.5:0.40-0.42:0.15-0.17。

5.根据权利要求2所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法，其特征在于：所述ZnCl₂和柠檬酸铁摩尔比为1:0.12-0.13。

6.根据权利要求1所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法，其特征在于：所述大孔树脂纯化步骤为：将抗衰老粗多糖调配成浓度3-5mg/mL的溶液，上样至大孔树脂D3520-Cl柱进行纯化，用去离子水进行洗脱，将收集的洗脱液减压浓缩至粘稠状态，再向浓缩液中加乙醇溶液，混合均匀，沉淀过夜，离心，干燥，备用。

7. 根据权利要求1所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法，其特征在于：所述离子交换层析步骤为：将大孔树脂纯化后的多糖用去离子水配成浓度18-22mg/mL的溶液，上样至DEAE Sepharose CL-6B柱进行离子交换层析纯化，分别用0mol/L、0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L、0.7mol/L的氯化钠溶液进行梯度洗脱，洗脱体积为3-4BV，流速为0.7-0.8mL/min，采用苯酚-硫酸法跟踪检测多糖含量，样品直到没有SFPS可以检出就可以，绘制洗脱曲线，分别收集各洗脱峰区间的洗脱液。

8.根据权利要求1所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法，其特征在于：所述透析步骤为：将离子交换层析后的洗脱液用截留分子量为3000-4000Da透析袋透析至袋外溶液的电导率与去离子水的电导率相同，透析液冷冻干燥。

9. 根据权利要求1所述的一种羊栖菜抗衰老多糖的纯化方法，其特征在于：所述凝胶色谱柱纯化步骤为：将透析得到的多糖粗品配成浓度38-42mg/mL的溶液，分别上样至Sephadex G-200凝胶柱进一步纯化，用蒸馏水进行洗脱，通过紫外-可见分光光度计跟踪检验其在480nm处的吸光度，分别以洗脱液的体积和吸光度为横纵坐标绘制洗脱曲线，收集各洗脱峰区域的洗脱液，选择抗老化效果最好的组分，浓缩至小体积，冷冻干燥，即得抗衰老多糖。