[发明专利]C肽化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和检测方法

权利要求书

1.C肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括：链霉亲和素包被的磁微粒；生物素标记的C肽抗体；吖啶酯标记的C肽抗体；清洗缓冲液；化学发光预激发液；校准品；质控品。

2.根据权利要求1所述的一种C肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述校准品包括低值校准品和高值校准品，所述低值校准品浓度为1ng/ml，所述高值校准品浓度为20ng/ml；所述质控品包括低值质控品和高值质控品，所述低值质控品浓度为1ng/ml，所述高值质控品浓度为20ng/ml。

3.根据权利要求1所述的一种C肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光预激发液包括酸性激发液和碱性激发液，所述酸性激发液为硝酸和过氧化氢溶液，所述碱性激发液为氢氧化钠溶液。

4.根据权利要求1所述的一种C肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述清洗缓冲液为PB缓冲液。

5.根据权利要求1所述的一种C肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素包被的磁微粒中，磁微粒与链霉亲和素的质量比为1:(10～20)。

6.根据权利要求1所述的一种C肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的C肽抗体中，C肽抗体与生物素的摩尔比为1:(5～20)。

7.根据权利要求1所述的一种C肽化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述吖啶酯标记的C肽抗体中，C肽抗体与吖啶酯的摩尔比为1:(5～20)。

8.制备权利要求1至7中任意一项所述的C肽化学发光免疫检测试剂盒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、链霉亲和素包被磁微粒

取磁微粒，用浓度为20mM的PB缓冲液清洗3次，用浓度为20mM的PB缓冲液稀释至10mg/ml；按照磁微粒与链霉亲和素质量比为1:(10～20)的比例添加链霉亲和素，37℃孵育18～24h后，置于磁分离架上分离磁珠；去上清，用浓度为20mM的PB缓冲液清洗3次，加入封闭液，37℃孵育18～24h后，置于磁分离架上分离磁珠；去上清，用浓度为20mM的PB缓冲液清洗3次，用浓度为20mM的PB缓冲液稀释至10mg/ml，得到链霉亲和素包被的磁微粒，2～8℃保存备用；

步骤二、生物素标记C肽抗体

取C肽抗体，用浓度为20mM的PB缓冲液置换C肽抗体保存液，用浓度为20mM的PB缓冲液稀释至1mg/ml；按照C肽抗体与生物素摩尔比为1:(5～20)的比例添加生物素，37℃孵育2～4h进行标记；加入封闭液，37℃孵育2～4h后，用蛋白纯化仪进行纯化，收集蛋白峰值，得到生物素标记的C肽抗体；

步骤三、吖啶酯标记C肽抗体

取C肽抗体，用浓度为20mM的PB缓冲液置换C肽抗体保存液，用浓度为20mM的PB缓冲液稀释至1mg/ml，按照C肽抗体与吖啶酯摩尔比为1:(5～20)的比例添加吖啶酯，37℃孵育2～4h进行标记；加入封闭液，37℃孵育2～4h后，用蛋白纯化仪进行纯化，收集蛋白峰值，得到吖啶酯标记的C肽抗体。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述封闭液选用浓度为20mM的PB缓冲液，其中含有2～5％的BSA。

10.如权利要求1至7中任意一项所述的C肽化学发光免疫检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、向样品中依次加入生物素标记的C肽抗体、吖啶酯标记的C肽抗体和链霉亲和素包被的磁微粒，样品中的C肽抗原与生物素标记的C肽抗体、吖啶酯标记的C肽抗体发生免疫反应，形成生物素-C肽抗体-C肽抗原-C肽抗体-吖啶酯溶剂；

步骤二、链霉亲和素包被的磁微粒与生物素相结合，形成磁珠-链霉亲和素-生物素-C肽抗体-C肽抗原-C肽抗体-吖啶酯复合物；

步骤三、加入清洗缓冲液，将杂质清洗去除；

步骤四、加入酸性激发液，使吖啶酯游离；

步骤五、加入碱性激发液，使吖啶酯发射光子；

步骤六、根据样品的光量子数计算出C肽的浓度。