[发明专利]铁蛋白化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种铁蛋白化学发光检测试剂盒及其制备方法，属于体外诊断试剂技术领域，解决现有技术灵敏度较低、反应时间较长、成本高等技术问题。试剂盒包括以下试剂：R1：含有链霉亲和素包被的磁微粒的液体；R2：含有生物素标记的铁蛋白抗体的液体；R3：含有吖啶酯标记的铁蛋白抗体的液体。本发明提供的铁蛋白化学发光检测试剂盒，采用双抗体夹心法的原理，同时利用亲和素‑生物素体系，采用吖啶酯化学发光，大大提高了试剂盒的检测灵敏度，减少反应时间，降低试剂成本，可用于血清/血浆中的铁蛋白含量的定量检测。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂的技术领域，尤其涉及一种铁蛋白化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

铁蛋白由蛋白壳和铁核两部分组成，蛋白壳由24个高度对称的亚基形成一个球形空腔结构，内径通常为7-8nm，外径为12-13nm，厚度2-2.5nm；铁核由数千个氢氧化铁分子和数百个磷酸盐分子组成。每个铁蛋白亚基外形成空心的柱状(长约5nm，直径约2.5nm)且由一个两两成反向平行的4个α螺旋簇(A、B和C、D)、C末端第五个较短α螺旋(E)以及N末端的伸展肽端(EP)构成。B和C螺旋之间由一段含18个氨基酸的BC环连接，E螺旋位于4α螺旋簇的尾端并与之成60°夹角。每两个铁蛋白亚基反向平行形成一组，再由这十二组亚基对构成一个近似正八面体，成4-3-2重轴对称的球状分子。每个铁蛋白分子形成12个二重轴通道、8个三重轴通道、6个四重轴通道，这些通道被认为是铁蛋白内部与外部离子出入铁蛋白的必经之路，起着联系铁蛋白内部空腔与外部环境的作用。

铁蛋白的分子量约为450kDa，沉降系数为17-18S。对于哺乳动物来说，铁蛋白通常由H和L两种类型的亚基组成。H亚基为重链，分子量约为21KD，L亚基为轻链，分子量约为19KD，两种亚基的氨基酸序列具有55％的相似度，而功能截然不同。H型亚基包含一个由His65、Glu27、Glu61、Glu107、Tyr34、Glu62和Gln141七个保守的氨基酸组成的亚铁氧化中心，主要负责亚铁离子的快速氧化，1个亚铁氧化中心可同时结合2个Fe2+离子；而L型亚基缺乏这个活性中心，但含有一个成核中心，负责亚铁离子的缓慢氧化以及矿物核的形成。两种亚基的组成比例具有组织特异性，如心脏和脑由于铁代谢旺盛而富含H型亚基，肝脏和脾脏由于主要用于铁的长期储藏而富含L型亚基。

铁蛋白是人体重要的铁贮存蛋白，参与对造血和免疫系统的调控。血清中铁蛋白水平可反映铁贮备情况及机体营养状态，它与多种疾病相关。

铁蛋白降低几乎都可以诊断为铁缺乏，主要因为：①铁贮存减少：如缺铁性贫血、营养不良等；②铁蛋白合成减少、维生素C缺乏等。在体内铁缺乏早期，尚无显著的贫血改变时，仅有体内铁贮存量减少，常规生化指标正常，血清铁蛋白就开始减少。铁蛋白含量测定是目前诊断隐性贫血最早最准确的指标，诊断符合率可达95.5％。部分自身免疫性疾病如全身性红斑狼疮、干燥综合征、某些胶原性病时铁蛋白也可明显降低。妊娠和哺乳期也可低于正常值。

铁蛋白升高可以表征为一下几种情况：①铁贮存增加原发性血色病、继发性铁负荷过多，如过多输血、不恰当铁剂治疗、溶血性贫血等。②铁蛋白合成增加炎症或恶性病变，如许多恶性肿瘤细胞可以合成和分泌铁蛋白，如肝癌、肺癌、胰腺癌、白血病、霍奇金病、多发性骨髓瘤等，铁蛋白测定已成为恶性肿瘤辅助诊断指标之一；甲状腺功能亢进症时铁蛋白合成也增加。③组织内的铁蛋白释放增加急性肝炎、慢性肝炎或其他肝病时血清铁蛋白也明显增高。在肝硬化等高危患者中同时测定AFP与铁蛋白对于早期发现肝癌有重要价值。急性心肌梗死早期也出现铁蛋白升高。