[发明专利]一种减少蛋白在protein L凝胶层析中形成多聚体的方法在审
| 申请号： | 201811061562.1 | 申请日： | 2018-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN109111498A | 公开（公告）日： | 2019-01-01 |
| 发明（设计）人： | 彭延杰;展波;曹强庚;庞广礼;林童俊;丁艳;李锋;梁邦领 | 申请（专利权）人： | 山东省生物制品研究所 |
| 主分类号： | C07K1/22 | 分类号： | C07K1/22 |
| 代理公司： | 济南舜昊专利代理事务所(特殊普通合伙) 37249 | 代理人： | 许静 |
| 地址： | 271000 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 凝胶层析 多聚体 洗脱 蛋白 去除 葡聚糖凝胶层析 半胱氨酸 纯化蛋白 工艺操作 类似蛋白 有效抑制 降解 中和 参考 研究 | ||
1.一种减少蛋白在protein L凝胶层析中形成多聚体的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)在protein L洗脱体系中加入半胱氨酸(Cys)，利用NaOH溶液中和洗脱体系；
(2)蛋白protein L凝胶层析纯化后的样品利用G25葡聚糖凝胶层析处理，用于去除Cys；
所述步骤(1)中洗脱体系的pH为2.0-7.0。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱体系选自柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液中的任意一种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在洗脱体系中加入0.1M的Cys，利用0.5M的NaOH溶液中和洗脱体系至pH为8.5±0.3。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，减少融合蛋白4D5Fv-PE25在protein L凝胶层析中形成多聚体的方法。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)用5倍柱体积的PBS平衡液平衡protein L凝胶层析柱；
(2)将融合蛋白4D5Fv-PE25以20mg/ml凝胶的上样量进行上样；
(3)再用5倍柱体积的PBS平衡液平衡protein L凝胶层析柱；
(4)用含有半胱氨酸的洗脱体系进行蛋白洗脱，并收集洗脱液；
(5)将洗脱体系轻微混匀后，立即利用NaOH溶液将洗脱体系中和至pH为8.5±0.3；
(6)利用超滤浓缩的方法将中和液浓缩至蛋白含量为2mg/ml；
(7)将浓缩样品上样至用PBS平衡好的G25葡聚糖凝胶柱后，用PBS缓冲液洗脱，收集洗脱液即可获得目的蛋白的单体。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中用含有0.1M半胱氨酸的洗脱体系进行蛋白洗脱。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中用含有0.1M半胱氨酸的30mM柠檬酸洗脱缓冲液进行蛋白洗脱。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中将洗脱体系轻微混匀后，立即利用0.5M的NaOH溶液将洗脱体系中和至pH为8.5±0.3。
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