[发明专利]检测植物中茉莉酸含量以及茉莉酸和茉莉酸甲酯总含量的酶联免疫吸附分析方法

说明书

本发明公开了一种检测植物样品中茉莉酸（JA）含量以及茉莉酸和茉莉酸甲酯（JAs）总含量的酶联免疫吸附分析方法（ELISA）。其特点是运用杂交瘤技术，成功制备了一种对茉莉酸甲酯（MeJA）具有高灵敏度及高特异性的单克隆抗体，建立了以茉莉酸甲酯（MeJA）为检测目标物的间接竞争ELISA。该方法检测茉莉酸甲酯（MeJA）的灵敏度（IC₅₀值）为2.02 ng/mL，检出限（LOD值）为0.20 ng/mL。本发明所建立的检测植物样品中茉莉酸类植物激素含量的方法具有高灵敏、高特异、快速、样品用量小、高通量的特点，为深入研究茉莉酸类植物激素的生理效应等提供了强有力的分析检测方法。

一、技术领域

本发明涉及一种检测植物中茉莉酸(JA)含量以及茉莉酸和茉莉酸甲酯(JAs)总含量的酶联免疫吸附分析方法(ELISA)，属于分析化学的研究领域。

二、背景技术

以茉莉酸(jasmonic acid, JA)和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate, MeJA)为典型代表的茉莉酸类植物激素(jasmonates, JAs)是一种新型天然植物生长调节剂，具有广谱的生理效应，普遍存在于多种高等植物体内。作为天然的内源植物激素，JA和MeJA都可以控制信号转导和调节生长，具有在分子、细胞、器官和个体等水平调节植物生长发育的多种生理效应。通过茉莉酸类激素(JAs)的响应转录因子的自身调节，JAs在植物次生代谢物的积累中起着重要作用，这些次生代谢物是药物、食品添加剂和精细化学品的重要资源。此外，茉莉酸类激素(JAs)被认为在生物和非生物防御反应中起着关键作用，也参与了一些病原体引起的防御反应。已有研究表明，茉莉酸类信号分子可作为环境信号分子有效地介导植物对病原菌、食草动物及非生物胁迫等的防御反应，诱导一系列防御基因的表达、防御反应化学物质的合成，并调节植物的“免疫”和应激反应。JAs与其他植物信号分子的拮抗或协同相互作用可调节防御和应激响应基因表达，以响应生物和非生物胁迫。另外，茉莉酸类激素(JAs)对子叶气孔发育具有一定的调控作用，其中子叶是促进植物与环境间气体、水汽交换的重要通道。因此，作为内源性信号分子，茉莉酸类激素(JAs)生理效应在植物中极为复杂。

茉莉酸类激素(JAs)还可以作为外源激素使用，也可以通过形态学和生理变化的形式发挥抑制或促进（诱导）的各种作用。大多数外源性的JA或MeJA是合成的，而后者很容易从香水行业获得，这无疑增加了JAs的商业价值。据报道，外源性MeJA的应用可以大大提高植物的防御能力，使植物抗咀嚼昆虫的死亡率从80%降低到12%左右。外源JAs也参与调控水果蔬菜的营养质量，包括调控番茄红素、花青素等一系列次生代谢物的含量。

但是，内源性JAs对植物生长的确切机制和作用有待进一步的发现和验证。外源性JAs引起的内源性JAs的变化仍需探索，这对指导农业生产具有现实意义。然而，JAs在植物体内含量（µg ~ ng / g鲜重）很低和周围杂质干扰很多，导致其分析方法的灵敏度受到限制。因此，建立一种特异性强、灵敏度高的内源性信号化合物测定方法具有重要的意义。随着分离和分析技术的发展，各种定性和定量分析方法在JAs的分析方面得到了应用，包括放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附分析法(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱仪(GC/MS)、液相色谱-质谱联用法(LC/MS)、液相色谱-质谱联用法(LC/MS/MS)、超高效液相色谱-电喷雾-电离质谱联用法(UPLC/ESI-MS)等等。与常规仪器法相比，免疫分析法价格低廉、操作简单、方法灵敏，仅需要少量植物样品，而且它有很强的抗干扰能力。

酶联免疫吸附分析方法(ELISA)具有灵敏度高、特异性强、分析快速的优点，已经广泛用于临床、药物、食品和环境等分析领域。到目前为止，有关植物中茉莉酸类激素的免疫分析方法的论文很少，也只有为数不多的仪器方法可做到同时检测植物中茉莉酸和茉莉酸甲酯。本方法建立了高灵敏高特异测定植物中茉莉酸含量以及茉莉酸与茉莉酸甲酯总含量的以单克隆抗体为基础的酶联免疫吸附分析方法(ELISA)，为茉莉酸类植物激素的进一步研究奠定了坚实的基础。

三、发明内容