[发明专利]海洋噬箘体Syn5的RNA聚合酶终止序列及其鉴定方法与应用

权利要求书

1.海洋噬菌体Syn5 RNA聚合酶转录终止序列，其特征在于，所述终止序列含有至少一个ATCTGT序列单元。

2.如权利要求1所述海洋噬菌体Syn5 RNA聚合酶转录终止序列的鉴定方法，其特征在于，含有以下步骤：

(1)将外源基因插入载体的多克隆位点处，并将所述载体中的启动子序列替换为海洋噬菌体Syn5启动子序列，获得重组载体；利用限制性内切酶将所述重组载体进行酶切，得到线性化的重组载体；

(2)构建体外转录反应体系，所述体外转录反应体系以步骤(1)所述线性化的重组载体作为模板，以噬菌体Syn5 RNA聚合酶作为RNA聚合酶，以ATP、GTP、CTP和UTP四种核苷三磷酸作为原料，使所述线性化的重组载体发生体外转录反应；加入DNA酶以消除作为模板的线性化的重组载体，然后纯化转录得到的RNA产物；

(3)将步骤(2)得到的RNA产物进行凝胶电泳，回收全长转录的RNA以外的RNA产物并进行3’RACE测序，所述全长转录的RNA以外的RNA产物对应的终止位点均含有至少一个ATCTGT序列单元，即得到海洋噬菌体Syn5 RNA聚合酶转录终止序列含有至少一个ATCTGT序列单元。

3.如权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(1)所述载体为pET28b，步骤(1)所述限制性内切酶为限制性内切酶BglII。

4.如权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)所述体外转录反应的时间为1h-2h。

5.如权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)所述噬菌体Syn5 RNA聚合酶在体外转录反应体系中的浓度为1μΜ-2μΜ。

6.如权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)所述线性化的重组载体在体外转录反应体系中的浓度为20ng/ul-40ng/ul。

7.如权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)所述体外转录反应体系中还包括RNA酶抑制剂。

8.如权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)所述体外转录反应体系中还包括Tris-HCl缓冲液、MgCl₂、亚精胺、二硫苏糖醇和焦磷酸酶。

9.如权利要求1所述海洋噬菌体Syn5 RNA聚合酶转录终止序列在RNA合成生物学中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用为在转录模板中插入所述噬菌体Syn5 RNA聚合酶转录终止序列以终止转录反应，或所述应用为在转录模板中将所述噬菌体Syn5 RNA聚合酶转录终止序列进行同义突变以继续进行转录反应。