[发明专利]一种共价环状闭合单链RNA在三阴乳腺癌试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及基因技术领域，具体公开了一种共价环状闭合的单链RNA及其应用；本发明先收集待测疑似三阴乳腺癌组织标本，抽提总RNA，以总RNA为模板将共价环状闭合的单链RNA(hsa_circRNA_007255)特异性逆转录成cDNA，再用特异性PCR引物进行实时定量PCR扩增，以β‑actin作为内参基因，获得共价环状闭合的单链RNA相对定量ΔCT值，当ΔCT≤11.27时提示共价环状闭合的单链RNA表达阳性。本发明通过相对定量的检测疑似三阴乳腺癌组织标本中共价环状闭合的单链RNA表达状况，用于三阴乳腺癌病人预后预测中的应用。

技术领域

本发明涉及乳腺癌诊断技术领域，共价环状闭合的单链RNA及其在三阴乳腺癌上的应用。

背景技术

乳腺癌是全世界发病率最高的女性恶性肿瘤。中国作为人口大国和独特的老龄化社会形态，乳腺癌发病率增长速度高于其他国家，形势不容乐观。乳腺癌至今仍没有得到充分有效的控制，乳腺癌仍然呈现较高的死亡率，主要原因是其复发和转移，乳腺癌一旦发生转移，平均存活率大概只有4-5年。三阴乳腺癌是指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人类表皮生长因子受体-2(HER-2)表达均阴性的乳腺癌，占整个乳腺癌群体的15％-20％。三阴乳腺癌临床特征不仅表现为侵袭性强、组织学分级较高、预后差、易发生内脏转移，且缺乏内分泌治疗及针对HER-2的分子靶向治疗的相应靶点，治疗手段的选择相对于其它分子亚型乳腺癌受到限制。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种共价环状闭合单链RNA在三阴乳腺癌试剂盒中的应用。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种共价环状闭合的单链RNA，所述共价环状闭合的单链RNA为小分子非编码环状，来源于KIF4A基因的外显子区域，其序列如SEQ No：1所示。

共价环状闭合的单链RNA(RNA circKIF4A)属于内源性非编码RNA的一种。具有结构稳定、丰度高和组织特异性表达等特征。其作为竞争性内源RNA(ceRNA)来发挥基因表达调控的作用。环状RNA利用其microRNA(miRNA)应答元件结合miRNA，以阻断miRNA对其靶标表达的抑制作用，从而调控其他相关RNA的表达水平。共价环状闭合的单链RNA(RNAcircKIF4A)与蛋白编码基因一样，具有主要的生物学功能，是肿瘤新的判定预后标志物和靶向治疗不错的工具，尤其是在三阴乳腺癌内高表达，为人类战胜三阴性乳腺癌提供新的策略。

较佳地，所述对circKIF4A进行逆转录使用转录试剂盒和逆转录特异性引物，分别为普洛麦格Promega公司的逆转录试剂盒A3500和上海吉玛生物技术有限公司生产的逆转录特异性引物QPM010。

20μL逆转录反应的体系如下：

逆转录程序：16℃30分钟，42℃30分钟，85℃10分钟。

(3)circKIF4A特异性实时定量PCR

先将circKIF4A逆转录产物分别稀释至2倍，然后混匀；

circKIF4A特异性实时定量PCR中，20μL反应体系如下：

circKIF4A实时定量PCR反应程序：95℃3分钟，40个循环，95℃12秒，62℃35秒，使用SYBR-Green染料进行实时定量PCR扩增。

所述circKIF4A特异性PCR引物为：

正向引物为5′-GAGGTACCCTGCCTGGATCT-3′

反向引物为5′-TGGAATCTCTGTAGGGCACA-3′；