[发明专利]一种产岩藻糖基乳糖的重组表达质粒载体、代谢工程菌及生产方法

权利要求书

1.一种重组表达质粒载体，其特征在于，所述重组表达质粒载体包含谷氨酸棒杆菌超氧化物歧化酶编码基因sod启动子与由所述sod启动子调控表达的微生物来源的基因融合形成的基因，所述微生物来源的基因包括编码GDP-甘露糖-6-脱氢酶Gmd、GDP-岩藻糖合成酶WcaG、乳糖通透酶lacY、α-1,2-岩藻糖转移酶FutC；

所述重组表达质粒载体还包括超氧化物歧化酶编码基因sod启动子与编码磷酸甘露糖异构酶ManA、磷酸甘露糖变位酶ManB和甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶ManC的基因融合形成的基因；

所述sod启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的重组表达质粒载体，其特征在于，所述重组表达质粒载体是采用重叠延伸PCR将所述sod启动子序列与编码GDP-甘露糖-6-脱氢酶、GDP-岩藻糖合成酶、乳糖通透酶、α-1,2-岩藻糖转移酶的基因克隆到表达载体上融合形成，所述的表达载体为pXMJ19。

3.根据权利要求1所述的重组表达质粒载体，其特征在于，所述重组表达质粒载体是采用重叠延伸PCR将所述sod启动子序列与编码磷酸甘露糖异构酶ManA、磷酸甘露糖变位酶ManB和甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶ManC的基因克隆到表达载体上融合形成，所述的表达载体为pEC-XK99E。

4.一种重组表达质粒载体，其特征在于，所述重组表达质粒载体包含谷氨酸棒杆菌超氧化物歧化酶编码基因sod启动子与由所述sod启动子调控表达的微生物来源的基因融合形成的基因，所述微生物来源的基因包括编码GDP-甘露糖-6-脱氢酶Gmd、GDP-岩藻糖合成酶WcaG、乳糖通透酶lacY、α-1,3-岩藻糖转移酶FutA的基因；

所述重组表达质粒载体还包括超氧化物歧化酶编码基因sod启动子与编码磷酸甘露糖异构酶ManA、磷酸甘露糖变位酶ManB和甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶ManC的基因融合形成的基因；

所述sod启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5.根据权利要求4所述的重组表达质粒载体，其特征在于，所述重组表达质粒载体是采用重叠延伸PCR将所述sod启动子序列与编码GDP-甘露糖-6-脱氢酶、GDP-岩藻糖合成酶、乳糖通透酶、α-1,3-岩藻糖转移酶的基因克隆到表达载体上融合形成，所述的表达载体为pXMJ19。

6.根据权利要求4所述的重组表达质粒载体，其特征在于，所述重组表达质粒载体是采用重叠延伸PCR将所述sod启动子序列与编码磷酸甘露糖异构酶ManA、磷酸甘露糖变位酶ManB和甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶ManC的基因克隆到表达载体上融合形成，所述的表达载体为pEC-XK99E。

7.一种产岩藻糖基乳糖的谷氨酸棒杆菌代谢工程菌，其特征在于，所述工程菌是采用权利要求1所述的重组表达质粒载体，转化宿主细菌得到，所述宿主细菌为谷氨酸棒杆菌。

8.一种产岩藻糖基乳糖的谷氨酸棒杆菌代谢工程菌，其特征在于，所述工程菌是采用权利要求4所述的重组表达质粒载体，转化宿主细菌得到，所述宿主细菌为谷氨酸棒杆菌。

9.权利要求7所述的产岩藻糖基乳糖的谷氨酸棒杆菌代谢工程菌在生产2’-岩藻糖基乳糖中的应用。