[发明专利]检测致痫大鼠海马组织谷氨酸及r-氨基丁酸含量的方法

权利要求书

1.检测致痫大鼠海马组织谷氨酸及r-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)致痫大鼠模型的建立：取SD大鼠，用剂量为80mg/kg的戊四唑进行皮下注射，观察大鼠行为，根据Racine分级标准，选择IV-V级致痫大鼠作为致痫大鼠模型；

(2)将步骤(1)中得到的所述致痫大鼠达到癫痫发作级别后30min时断头取海马组织，称取海马组织，冰上匀浆，取海马组织匀浆加入50vol％的甲醇溶液，按照每100mg加入1mL甲醇溶液计算，-4℃,12000rpm离心20-30min，取上清与乙腈1:1混合后，-4℃,12000rpm离心20-30min得到的上清液为样品，将样品进行衍生处理；

其中，样品衍生处理的具体步骤为向样品中加入柱前衍生剂、乙腈、去离子水和硼酸-硼砂缓冲液，加入的柱前衍生剂、乙腈、去离子水和硼酸-硼砂缓冲液与样品的体积比分别为7～9:10～12:8～10:7～9:4，所述硼酸-硼砂缓冲液的pH为8.6，放入40℃恒温水浴箱中反应5min，然后经0.22μm微孔滤膜过滤，其中，所述柱前衍生剂为9-芴甲基氯甲酸酯；

(3)衍生后的样品通过高效液相色谱进行检测，测定样品中的谷氨酸及r-氨基丁酸含量，色谱条件如下：

色谱柱采用反向C18色谱柱；

流速：1.0mL/min；

柱温：30-35℃；

检测波长：265nm；

进样量：20uL；

流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为40-60mmol/L乙酸钠溶液和四氢呋喃，二者体积比为99:1，所述乙酸钠溶液用冰醋酸调节pH至4.8，所述流动相B为乙腈；

采用如下梯度洗脱程序：

2.根据权利要求1所述的检测致痫大鼠海马组织谷氨酸及r-氨基丁酸含量的方法，其特征在于,所述柱温为30-32℃。