[发明专利]一种人非小细胞肺癌外周血髓源性抑制细胞的检测方法及其应用在审
| 申请号： | 201811077764.5 | 申请日： | 2018-09-16 |
| 公开（公告）号： | CN108982857A | 公开（公告）日： | 2018-12-11 |
| 发明（设计）人： | 田建辉;罗斌;阙祖俊;钱芳芳;董昌盛 | 申请（专利权）人： | 上海中医药大学附属龙华医院 |
| 主分类号： | G01N33/574 | 分类号： | G01N33/574 |
| 代理公司： | 上海中优律师事务所 31284 | 代理人： | 潘诗孟 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 非小细胞肺癌 外周血 检测 人非小细胞肺癌 流式细胞仪 细胞 样本 小分子抑制剂 表面标记 临床病情 临床治疗 免疫治疗 免疫状态 中药复方 静脉血 靶点 外周 亚群 制备 筛选 评估 预测 应用 制定 | ||
1.一种人非小细胞肺癌外周血的髓源性抑制细胞的检测方法，其特征在于，包括如下步骤:
(1)配置红细胞裂解液；
(2)标记流式上样管：MDSC、空白、同型对照，并用移液器吸取100μl全血，加入上样管；
(3)采用移液枪在每个上样管中加Fc封闭剂5μl，避光封闭5min；
(4)在标记MDSC字样的上样管中加入5μl Human APC-CD11b抗体、Human FITC-CD14抗体、Human PE/Cy7-CD15抗体和Human PE-CD33抗体；空白管加入纯水；同型对照分别加入IgA/Iγ；避光孵育15min；
(5)每支上样管加红细胞裂解液3ml，避光裂解10min；
(6)至上样管内液体澄清透明后，用离心机离心5min，转速1500r/min；
(7)弃上清，加入PBS重悬，重复上述步骤(6)离心2遍；
(8)弃上清后，加300μl PBS重悬并在涡旋震荡仪上轻微震荡；
(9)流式细胞仪上样检测；
(10)MDSC检测的设门：根据空白管和同型对照，先圈定Gate1表示外周血单个核细胞PBMC,并设定细胞为10,000个；再设门根据CD14和CD11b的表达情况，圈定Gate2和Gate3分别表示细胞群CD14+CD11b+及CD14-CD11b+；再根据CD33和CD15的表达情况，以及同型对照的分布趋势，再进一步圈定pmn-MDSC与m-MDSC。
2.根据权利要求1所述的人非小细胞肺癌外周血的髓源性抑制细胞的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述红细胞裂解液的配置：20g氯化铵、15g高氯酸氨和0.2g碳酸氢氨加入5000ml蒸馏水中溶解，通过0.22nm过滤膜过滤除菌，4℃保存，备用。
3.根据权利要求1所述的人非小细胞肺癌外周血的髓源性抑制细胞的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述全血为清晨空腹在研究对象的右臂静脉采取得新鲜静脉血2ml，备用。
4.权利要求1-3所述的任一项检测方法用于评估非小细胞肺癌患者的外周免疫状态，进而对非小细胞肺癌患者的临床病情变化进行预测。
5.权利要求1-3所述的任一项检测方法用于筛选抑制MDSCs功能的小分子抑制剂或中药复方。
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