[发明专利]一种人非小细胞肺癌外周血髓源性抑制细胞的检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种人非小细胞肺癌外周血的髓源性抑制细胞的检测方法，采用非小细胞肺癌患者外周静脉血制备流式细胞仪检测的样本，利用流式细胞仪检测样本中髓源性抑制细胞比例，在检测过程中确定了MDSCs表面标记，明确了MDSCs不同亚群在非小细胞肺癌外周血中的表达比例。运用本发明检测方法，首先，评估非小细胞肺癌患者外周血中的免疫状态，进而预测其临床病情发展程度，为临床治疗方案的制定提供依据；其次，为非小细胞肺癌的免疫治疗提供一定的靶点，可以筛选抑制MDSCs功能的小分子抑制剂或中药复方。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫学、细胞生物学领域，涉及一种人非小细胞肺癌外周血髓源性抑制细胞的检测方法；此外，本发明还涉及前述检测方法的应用。

背景技术

肺癌是发病人数和死亡人数增长最快、对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一，已成为世界范围内亟需解决的公共卫生问题【Torre LA,Bray F,Siegel RL, etal.Global cancer statistics,2012.[J].Ca Cancer J Clin,2015,65(2):87.； Chen W,Zheng R,Baade PD,et al.Cancer statistics in China,2015[J].Ca A Cancer Journalfor Clinicians,2016,66(2):115-132.】。由于人口老龄化、吸烟、大气污染等环境问题导致肺癌高危人群迅速扩大，而早期诊断技术的发展导致早期肺癌术后患者的比例不断升高，故开展新的治疗方法刻不容缓。近二十年肺癌的治疗手段取得显著的进展，从手术、化疗、放疗到分子靶向治疗，再到目前的免疫治疗，使肺癌患者的生存期及生活质量均取得了明显的改善；肺癌的免疫治疗经历了免疫疫苗、分子靶向、免疫细胞、免疫检查点阻滞剂的发展，在2015年免疫治疗被评为十大科技进展之一；目前，免疫治疗成为研究的热点，主要是免疫编辑理论的机制研究的突破，而MDSCs是免疫编辑理论中重要成分之一，具有免疫抑制功能。

在上世纪70年代，研究者发现存在一群细胞不论在体内还是体外均可抑制免疫功能，被称为“自然抑制细胞”(Nature Suppressor Cells,NS)【Gabrilovich DI, HurwitzAA.Tumor-induced immune suppression[M].Springer， 2008.DOI:10.1007/978-1-4899-8056-4】；至1995年，Seung等首次证明MDSCs可以导致免疫监视下调及促进肿瘤生长【SeungLP,Rowley DA,Dubey P,et al. Synergy between T cell immunity and inhibition ofparacrine stimulation causes tumor rejection[J].Proc Natl Acad Sci,1995,92(14):6254-6258.】；至2007年，这一群具有免疫抑制功能的细胞被国际统一命名为髓源性抑制细胞【Gabrilovich DI,Bronte V,Chen SH,et al.The terminology issue formyeloid-derived suppressor cells[J].Cancer Res,2007,67(1):425.】。MDSCs 具有高度异质性，在不同的肿瘤之间其表面标志也存在差异。在人类中，MDSCs可能分为三群，即表达CD14–CD11b+CD33+CD15+或CD66b+的多形核MDSC(pmn-MDSC)、表达CD14+HLA-DR–/low的单核MDSC(m-MDSC)以及表达Lin–HL-ADR–CD33+的代表髓系祖细胞的MDSC【Marvel D,Gabrilovich DI.Myeloid-derived suppressor cells in the tumormicroenvironment:expect the unexpected[J].J Clin Invest,2015,125(9):3356-3364.】。尽管有很多表面标志被众多研究者提出，但是确切的标志尚待进一步探讨，而且在不同的肿瘤患者体内其表型亦可能存在差异。在肺癌中，Vetsika等研究了表达CD14+CD15–CD11b+CD33+HLA-DR–Lin–和 CD14+CD15+CD11b+CD33+HLA-DR–Lin–的单核类MDSCs以及表达 CD14–CD15+CD11b+CD33+HLA-DR–Lin–的pmn-MDSC，发现MDSCs是未行治疗的非小细胞肺癌患者的独立预后因子【Vetsika EK,Koinis F,Gioulbasani M,et al.A circulatingsubpopulation of monocytic myeloid-derived suppressor cells as an independentprognostic/predictive factor in untreated non-small lung cancer patients[J].JImmunol Res,2014:659294.】。