[发明专利]一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体及其制备方法

说明书

本发明提供了一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体及其制备方法。本发明的微载体以魔芋葡甘聚糖微球为基质，用生物仿生新材料人造细胞膜覆层微球。本发明的微载体的制备方法如下：将基质微球分别用石油醚和无水乙醇洗涤后，烘干备用；将2‑甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱(MPC)与甲基丙烯酸正丁酯溶解于乙醇，在引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)的作用下聚合成为人造细胞膜材料，将其稀释到2%浓度后备用；将洗涤好的魔芋葡甘聚糖微球加入到人造细胞膜乙醇溶液中浸泡后，在真空下用旋转蒸发仪干燥后即得微载体产品。该微载体表面人造细胞膜材料覆盖均匀，连接牢固，具有无毒性、细胞贴壁好、可降解、细胞容易洗脱不粘连等优点，且制成的微载体成本低廉，生产过程简单，周期较短，有利于工业化生产。

技术领域

本发明属于生物材料的组织工程技术领域，尤其涉及一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体及其制备方法。

背景技术

微载体培养技术是目前公认的最有发展前途的一种用于动物细胞大规模培养的技术。1967 年Van Wezel 首次将微载体用于动物细胞培养以来，微载体培养技术已发展成为目前贴壁依赖性细胞规模化培养的主要方法。微载体具有比表面积大、培养基利用率高和细胞收集过程简单等优点，广泛用于多种细胞的培养和疫苗、抗体、核酸等生物制品的生产，并在组织工程和再生医学领域具有一定的应用前景。至今国际市场上出售的微载体商品类型已达十几种，其中常用的商品化微载体有三种:Cytodex1,2,3,Cytopore和Cytoline，目前最常使用的是Cytodexl,2,3型微载体。

魔芋葡甘聚糖( KGM) 是一种天然高分子多糖，具有良好的生物相容性和无毒性等， KGM 微球透明度高，机械性能好且密度适宜是一种潜在的微载体基质，目前国内研究报道比较多，众多文献和专利对合成方法进行了介绍，如：CN201210523380.8，但将KGM 微球进行表面改性用于动物细胞培养鲜有报道。

二十世纪末，日本油脂株式会社（NOF CORPORATION.）在开发的仿生材料系列产品（LIPIDURE）方向上走在了世界前列，他们开发的这类医学仿生材料由于其极高的保湿透气性能和与人体细胞膜极其相似的成分及特性，被誉为人造细胞膜。

这种高端医学仿生材料具有高度的生物相容性，研究表明使用LIPIDURE涂覆产品可防止细胞线粘附在基材表面，同时可防止蛋白质被吸附到基材表面，使浮游培养成为可能。人造细胞膜已经广泛应用于生物医药领域和医疗器械领域，并且已经商品化：用于制造血液透析膜治疗尿毒症患者；涂于生物支架(scaffold)材料用于扩张血管；做成仿细胞膜聚合物胶束缓释药物提高疗效；应用于生物医药领域的芯片表面减少对于蛋白质、DNA、细胞等的非特异性吸附；涂覆于人造关节材料表面减少其与软组织间的界面摩擦问题，增加寿命；涂覆于人造血管内壁减少血小板的聚集，减少血栓风险；用作软性隐形眼镜材料；高档化妆品的保湿原料。

由以上综述可见KGM 微球是一种优良的微载体基质，人造细胞膜LIPIDURE是很好的微载体涂覆材料，将两者的优势结合在一起，这种人造细胞膜覆层微载体在细胞培养上的有着潜在的巨大优势，给我们在这一领域探索提供了广阔空间。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体及其制备方法，该微载体表面人造细胞膜材料覆盖均匀，连接牢固，具有无毒性、细胞贴壁好、可降解、细胞容易洗脱不粘连等优点，且制成的微载体成本低廉，生产过程简单，周期较短，有利于工业化生产。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体的其制备方法，包括如下步骤，

1）将魔芋葡甘聚糖微球加入到石油醚中，搅拌洗涤，过滤后再加入到乙醇中，搅拌洗涤，过滤烘干后备用；