[发明专利]一种利用蛋白酶制备脱脂豆粕贮铁多肽的方法和应用有效
申请号: | 201811079344.0 | 申请日: | 2018-09-17 |
公开(公告)号: | CN109438552B | 公开(公告)日: | 2022-03-25 |
发明(设计)人: | 杨瑞;孟德梅;周中凯 | 申请(专利权)人: | 天津科技大学 |
主分类号: | C07K1/14 | 分类号: | C07K1/14;C07K1/16;C07K1/34;C07K1/36;C12P21/06;A23L33/18;A23K20/147;A23L29/00 |
代理公司: | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人: | 韩晓梅 |
地址: | 300457 天津市滨*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 利用 蛋白酶 制备 脱脂 豆粕 多肽 方法 应用 | ||
1.一种利用蛋白酶制备脱脂豆粕贮铁多肽的方法,其特征在于:步骤如下:
以脱脂的大豆豆粕为原料,利用水提法提取并分离铁蛋白,通过蛋白酶解技术获得含铁多肽组分,并进一步应用分级超滤技术得到具有高铁含量的贮铁多肽;
具体步骤如下:
利用脱脂的大豆豆粕为原料,使用0.05-0.10 M磷酸缓冲液浸泡豆粕,所述磷酸缓冲液的pH为 7.0,且其含质量百分数为1%的聚乙烯吡烷酮,磷酸缓冲液:豆粕质量比为10-15 :1,浸泡时间为6-8 h,然后使用内切式匀浆机匀浆2-3min,得蛋白粗提液;
向蛋白粗提液中加入浓度为 50-100 mM的 MgCl2晶体,溶解后立即4500-5000 g离心5-10min,弃沉淀,得上清液;
上清液静置20-30 min后,加入浓度为70-100 mM 的柠檬酸三钠晶体,静置6-24 h,经10000-12000g 离心20-30min后,得沉淀和离心后上清液,沉淀即为大豆铁蛋白,该大豆铁蛋白不复溶于该离心后上清液;
在离心获得的沉淀中加入其1.5-3倍体积的离心上清液,冲洗沉淀中的淀粉和核糖体,然后10000g离心5-10 min,弃上清,重复一至两次以上,直至只有褐色沉淀;
将沉淀溶于1.5倍体积蒸馏水中,10000g离心5-10min,弃上清;重复两次用5倍体积蒸馏水溶解沉淀,13000g离心5-10min,收集并合并上清液,获得豆粕大豆铁蛋白,该豆粕大豆铁蛋白的浓度为1.0-2.0 μM,其pH值为6.5-7.0;
向豆粕大豆铁蛋白中加入蛋白酶进行酶解,酶解参数为:酶浓度1000-2000 U、底物铁蛋白浓度1.0 -2.0μM、反应时间4h - 6h、反应pH 6.5-7.0、反应温度55-60℃,酶解后,即获得粗贮铁多肽;
对粗贮铁多肽进行超滤,使用超滤膜分级超滤,其截留分子量分别为1.5和3.0Kda,获得截留组分,即得贮铁多肽;
所述步骤的具体步骤为:
分级超滤多肽,通过两步超滤多肽组分:首先利用3.0Kda膜截留获得3.0Kda以下多肽片段,再经1.5Kda截留,获得该截留分子量以上片段,得到目标分子量2.0-3.0 kDa范围的多肽,即得贮铁多肽,获得的储铁多肽溶液浓度为0.32mg/mL,含铁量为8.3 *10-6mg/mL。
2.根据权利要求1所述的利用蛋白酶制备脱脂豆粕贮铁多肽的方法,其特征在于:所述步骤中蛋白酶为木瓜蛋白酶。
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