[发明专利]一种极化和扩增CD4+T细胞的方法及组合物及在治愈表达特异性抗原的肿瘤中的应用

说明书

本发明属于生物细胞领域，涉及一种极化和扩增CD4+T细胞的方法及应用，本发明采取人源或鼠源的CD4+未分化T细胞，采用T细胞激活和转化生长因子β,白细胞介素‑4,白细胞介素‑21和γ‑干扰素中和抗体一系列细胞因子共同刺激。以此方法极化的T细胞，在大量增殖的情况下，如14日内500‑1000倍，同时保有针对癌细胞的杀伤性和自我分化增殖能力。其性状不同于之前报导过，用于对抗癌症的Th1,Th17和Th9等亚群，并且在杀伤癌症功效上有所超过。以这种方法极化的CD4+T细胞亚群,其对多种表达特异性抗原的癌症，包括固体和血液肿瘤有强大治疗作用。

技术领域

本发明属于生物细胞领域，尤其涉及一种极化和扩增CD4+T细胞的方法及组合物及在治愈表达特异性抗原的肿瘤中的应用。

背景技术

免疫细胞回输是近年发明的癌症治疗方法，其基本原理是：回输的细胞会对宿主的癌症细胞和癌症组织产生特异性的攻击性，或刺激宿主体内的其他免疫细胞，使其攻击癌症。

研究者采用过多种细胞进行回输，包括T淋巴细胞，巨噬细胞(Macrophage)，自然杀伤细胞(NK)和自然杀伤T细胞(NKT)等。同时，很多实验采用了：以上列举细胞的加工和修饰(如嵌合抗原受体T细胞疗法，CAR-T)，或多种细胞联合使用，或采用细胞和其他药品/细胞素/疫苗的组合(比如注入T细胞后，持续注入IL-2)。T淋巴细胞的作用是主导的和不可或缺的，其他几种细胞独自使用几乎没有治疗效果。

T细胞回输疗法，对血液肿瘤和固体肿瘤都产生了不同程度的治疗效果。CAR-T疗法，在治疗B细胞急性淋巴细胞白血病(B cell ALL)上，取得了突破性的疗效。 Novartis和Kite Pharma的治疗方案Kymriah和Yescarta，前者在B cell ALL的化疗失败的病人身上取得了83％的癌症缓解率，后者在B cell ALL和B细胞淋巴癌 (DLBCL)化疗失败病人上，有51％的缓解率。但是这些疗法的缺陷之一是复发率较高。而且一旦复发，就不再有有效治疗手段。

相对其它效果来说，T细胞回输疗法，对固体瘤疗效欠佳。科学家和医生尝试采过用癌症侵入T细胞，DC激活的外周血T细胞和CAR-T细胞等，对化疗失败的黑色素瘤，肠癌，食道癌，肺癌，脑胶质瘤等多种固体肿瘤治疗，但是至今极少有临床实验，反应率超过50％。多数实验的反应率仅在10％-20％。

T细胞疗法疗法的功效和至少三个指标相关，一是T细胞对癌症的杀伤性，二是T细胞针对癌症的导向性，三是T细胞自身的存活。而且疗法如需成功，必须要专一性强，副作用小。其中导向性，使用CAR-T和癌症侵入T细胞则可以解决。T细胞的杀伤性和存活性，是目前急需增强的性质。如目前大多数实验室采用的细胞毒性CD8T细胞，在回输病人体内后，一个月内就会损失穿过99％。再如，数次CAR-T的临床试验中，有病人死于副作用-细胞素风暴。

T细胞有很多亚群，比较为人熟知的有CD4+T细胞，CD8+T细胞和NKT细胞等等。其中每种又有更加细化的亚群划分，如CD4+T细胞，被研究者明确报导过的亚群分为Th1(Helper T Cell Type1)，Th2，Th9，Th17，Tfh(Follicle B helper T cell)和Treg(Regulatory T cell)。

目前，大部分研究者在临床实验T细胞回输技术时，只关注采用了CD4+或CD8+的使用，而忽略了更加细分的亚群。如多数临床实验，采用的是纯化的CD8+T细胞，一小部分实验，采用了CD8+T细胞和CD4+T细胞按照1：1比例注射。另一小部分实验，采用了全CD4+T细胞。但是几乎没有临床实验深入关注CD8+和/或CD4+T细胞的具体构成。

发明内容