[发明专利]一种利用单步酶解同时提取油体及蛋白的方法

说明书

一种利用单步酶解同时提取油体及蛋白的方法，属于生物技术应用技术领域。本发明解决现有方法存在步骤繁琐，提取时间长，油体的产率的技术问题。方法：将大豆清理，脱皮，浸泡，粉碎后灭菌，调节含水量，向固态基质中接入菌株，发酵至产酶，离心，收集上清液作为水解酶，并加入到膨化大豆粉与水的混合液中得到酶解液，在灭酶后超声处理，离心分离得到油体和蛋白质。本发明首次将固态发酵与超声技术相结合，同步提取大豆中的有效成分，本发明与传统提取油体的方法相比，黑曲霉产生的酶和超声处理充分的破坏细胞壁结构，释放出完整的油体和蛋白质，所需设备简单、提取率高，获得的产品可以广泛应用于食品、化品和医药等行业。

技术领域

本发明属于生物技术在食品工业中的应用领域，具体涉及一种利用单步酶解同时提取油体和蛋白质的方法。

背景技术

油体是植物种子中用来储存油脂的细胞器，为种子发芽后生长提供能量。其直径通常为0.5～2.5um，油体的基本结构是油脂体内部的液态基质为甘油三酯，表面被单层磷脂-内源性蛋白质组成的生物膜覆盖，故油体是一种天然的微胶囊，并且可以形成稳定的水包油乳液。大豆油体富含多不饱和脂肪酸、磷脂、生育酚和植物甾醇等功能性成分，因此完整的油体可以提供很高的商业价值，在食品中具有巨大的应用潜力。

目前油体的提取方法不断进行改进。1990年Jacks等将种子进行浸泡、磨浆、过滤、离心并洗涤14次，最终分离出油体；Tzen等提出了一种植物种子油体提取的经典方法：种子浸泡(花生、大豆和葵花籽先浸泡6h)或不浸泡(油菜和芝麻)，用含0.6mol/L蔗糖的磷酸盐缓冲液磨浆、离心，并用Tween-20、氯化钠、尿素多次洗涤，可以提取出完整的、高纯度油体；Chen等报道了一种简单的大豆油体提取方法，主要步骤包括调节生豆浆pH 11，离心得到粗油体，然后粗油体在pH 11下洗涤两次。由于提取油体的步骤繁琐，提取时间长，同时繁琐的提取步骤也会使油体损耗，降低油脂体提取效率，影响了油脂体的产率；并且使用多种溶剂从含油种子中提取油体的常规方法，溶剂会残留在油脂体表面影响油体品质，因此限制了在食品、化妆品和医药行业中的综合利用。

发明内容

本发明解决现有提取油体方法存在步骤繁琐，提取时间长，油体的产率的技术问题，提供了一种利用单步酶解同时提取油体及蛋白的方法。本发明方法充分的破坏细胞壁结构，并释放出完整的油体和蛋白质。本发明方法简化了大豆油体的提取方法，以最大限度地收集完整的油体和蛋白质以实现高值化利用。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

该方法包括以下步骤：

步骤一、将大豆依次进行清理、脱皮、浸泡、粉碎后高温灭菌，调节含水量；

步骤二、然后接入黑曲霉菌种(对数期菌液或孢子悬浮液)进行发酵至产酶，离心，收集上清液作为水解酶；

步骤三、将膨化大豆粉碎，加入水，调pH值，在50℃条件下加入水解酶，保温酶解；

步骤四、然后灭酶，在超声处理，离心分离得到油体和蛋白质。

进一步地限定，步骤一所述高温灭菌温度为121℃，时间为15min。

进一步地限定，步骤一中调节含水量至其干重质量的20％；步骤二中接种量为物料干重质量的15％；所述发酵的条件为：相对湿度为70％，温度为25℃，时间为48h，素酶活力达到0.68FPU/mL以上，木聚糖酶活力达到95U/mL以上，果胶酶活力达到5.5U/mL以上，蛋白酶活力达到65.9U/mL以上，α-半乳糖苷酶活力达到8.4U/mL以上。

进一步地限定，步骤三中膨化大豆粉碎后与水按照1:3的重量比例混合。

进一步地限定，步骤三中pH值为4.8(调节到酶最适pH值)。

进一步地限定，步骤三中按1mL/g-10mL/g浓度添加水解酶；优选：按2mL/g浓度添加水解酶。