[发明专利]一种离体胎盘造血干细胞的制备方法

权利要求书

1.一种离体胎盘造血干细胞的制备方法，其特征在于：包括：

胎盘预处理；

对预处理之后的胎盘进行灌注清洗；

使用酶解液进一步的收集液体；

制作胎盘造血干细胞。

2.根据权利要求1所述的一种离体胎盘造血干细胞的制备方法，其特征在于：所述胎盘预处理的具体步骤为：在无菌手术室环境下采集正常顺产或剖腹产者的健康胎盘，分离出脐动脉和脐静脉，用清洗液清洗胎盘，收集清洗液。

3.根据权利要求2所述的一种离体胎盘造血干细胞的制备方法，其特征在于：所述健康胎盘需经过造血干/祖细胞定性检测，判断是否健康，若健康则分离出脐动脉和脐静脉，用清洗液清洗胎盘，收集清洗液，若不健康则放弃处理，所述清洗液为抗生素含量100～1000mg/L的溶液。

4.根据权利要求1所述的一种离体胎盘造血干细胞的制备方法，其特征在于：对预处理之后的胎盘进行灌注清洗的具体步骤为：用灌注装置的第一灌注针和第二灌注针分别插入至分离出脐动脉和脐静脉，然后通过灌注装置的第一灌注针和第二灌注针导入灌洗液，对胎盘进行灌注清洗，收集灌洗后的混合液一。

5.根据权利要求4所述的一种离体胎盘造血干细胞的制备方法，其特征在于：所述灌洗液为包括青-链霉素双抗、EDTA、枸橼酸盐缓冲溶液、维生素C、肝素钠注射液的 PBS 缓冲液。

6.根据权利要求1所述的一种离体胎盘造血干细胞的制备方法，其特征在于：使用酶解液进一步的收集液体的具体步骤为：使用灌注装置将酶解液灌注胎盘绒毛血管，收集灌注后的液体，获得混合液二。

7.根据权利要求1所述的一种离体胎盘造血干细胞的制备方法，其特征在于：制作胎盘造血干细胞的具体步骤为：取清洗液、混合液一以及混合液二离心后取细胞沉淀，然后依次经羟乙基淀粉法和红细胞裂解法回收纯化包含造血干细胞的单个核细胞，重悬后获得胎盘造血干细胞。