[发明专利]去铁铁蛋白-苯并噻唑化合物复合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种去铁铁蛋白-苯并噻唑化合物复合物的制备方法，其特征在于：将铁蛋白液体装入透析袋中，透析袋置于含巯基乙酸的pH4.5～5.5醋酸钠透析缓冲液中进行透析，透析过程中持续通入氮气保持无氧环境，每20～25min更换一次，直至透析袋中的液体呈无色，袋中液体用0.22μm过滤器无菌过滤后，制得去铁蛋白母液，BCA法测定母液蛋白浓度；将去铁铁蛋白和苯并噻唑化合物通过原位生产法，使苯并噻唑化合物装载至去铁铁蛋白中，获得去铁铁蛋白-苯并噻唑化合物复合物；

上述方法的具体步骤如下：

（1）制备透析缓冲液

将醋酸钠在室温下溶解于水中，用盐酸将pH调至4.5～5.5，制成浓度为0.05～0.2mol/L的醋酸钠透析缓冲液；

（2）在避光条件下，将巯基乙酸滴加入到醋酸钠透析缓冲液中，持续通入氮气2～3h后备用，其中巯基乙酸的添加量为醋酸钠透析缓冲液体积的0.1～0.15%；

（3）将铁蛋白液体用醋酸钠透析缓冲液稀释后，装入预先用醋酸钠透析缓冲液润湿的透析袋中，然后将透析袋放入步骤（2）含巯基乙酸的醋酸钠缓冲液中，搅拌透析，每隔20～25min更换一次含巯基乙酸的醋酸钠透析缓冲液，透析期间持续通入氮气，重复更换含巯基乙酸的醋酸钠透析缓冲液直到透析袋中液体由橙红色变为无色，透析袋中液体用0.22μm过滤器无菌过滤后，作为去铁铁蛋白母液，BCA法测定母液蛋白浓度，-20℃冻存，备用；

（4）包被缓冲液的制备

室温下，称取N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸溶解于水中，用1mol/L的NaOH溶液调节pH调至7，制得浓度为20～25mmol/L包被缓冲液；

（5）将去铁铁蛋白母液用包被缓冲液稀释至终浓度为1～4mg/mL，装入预先用包被缓冲液润湿的透析袋中，然后透析袋放入包被缓冲液中，4℃避光放置透析12h；另外用包被缓冲液配制终浓度为5～10mmol/L的苯并噻唑化合物溶液，待用；

配制苯并噻唑化合物溶液时，溶液中添加次氯酸钠，次氯酸钠终浓度为0.02mmol/L；

（6）在4℃避光、搅拌条件下，在透析后的去铁铁蛋白溶液中分10次加入苯并噻唑溶液，每隔30min加一次苯并噻唑化合物溶液，其中去铁铁蛋白与苯并噻唑化合物的摩尔比为1000～1500:1；

（7）在最后一次加药完成后，将溶液加入到新的透析袋中，置于包被缓冲液中，4℃避光放置12小时透析，去除未被包被的苯并噻唑化合物；

（8）取出透析袋中液体，离心去上清液，冷冻干燥除去溶剂，即得去铁铁蛋白-苯并噻唑化合物复合物；

所述苯并噻唑化合物为2-(4-氨基苯基)苯并噻唑化合物。

2.根据权利要求1所述的去铁铁蛋白-苯并噻唑化合物复合物的制备方法，其特征在于：2-(4-氨基苯基)苯并噻唑化合物为2-(4-氨基-3-甲基苯基)-5-氟苯、2-(4-甲氧基-3-甲氧基苯基)-5-氟苯、2-(4-甲氧基-3-甲氧基苯基)-5-氟苯或L-赖氨酸-(4-(5-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2-甲氧基)-苯基酯。

3.根据权利要求1所述的去铁铁蛋白-苯并噻唑化合物复合物的制备方法，其特征在于：步骤（3）、步骤（5）中透析袋的穿透分子量为12000-14000道尔顿；步骤（7）中透析袋的穿透分子量为3500道尔顿。

4.权利要求1-3中任一项所述去铁铁蛋白-苯并噻唑化合物复合物的制备方法制得的去铁铁蛋白-苯并噻唑化合物复合物。

5.权利要求4所述的去铁铁蛋白-苯并噻唑化合物复合物在制备靶向抗肿瘤药物中的应用。