[发明专利]去铁铁蛋白-苯并噻唑化合物复合物及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了去铁铁蛋白‑苯并噻唑化合物复合物及其制备方法，将铁蛋白液体装入透析袋中，透析袋置于含巯基乙酸的pH4.5～5.5醋酸钠透析缓冲液中进行透析，透析过程中持续通入氮气保持无氧环境，每20～25min更换一次，直至透析袋中的液体呈无色，袋中液体用0.22μm过滤器无菌过滤后，制得去铁蛋白母液，BCA法测定母液蛋白浓度；将去铁铁蛋白和苯并噻唑化合物通过原位生产法，使苯并噻唑化合物装载至去铁铁蛋白中，获得去铁铁蛋白‑苯并噻唑化合物复合物；本发明制得的化合物具有潜在的靶向抗肿瘤的作用。

技术领域

本发明属于医药领域，涉及利用去铁铁蛋白装载苯并噻唑化合物复合物的制备方法及其在靶向抗肿瘤中的应用。

背景技术

药物输送系统是肿瘤研究的热点之一，肿瘤靶向性药物输送体系的研究和应用更是癌症治疗研究领域中备受关注的部分。去铁铁蛋白(Apoferritin)是铁蛋白(ferritin)不含铁的存在形式，由24个蛋白质亚基构成，是天然的铁储存蛋白。已知很多肿瘤细胞表面大量表达铁蛋白特异性受体，可以通过铁蛋白受体与铁蛋白的结合介导对铁蛋白及去铁铁蛋白的内吞作用(Zhang, L.et al. Receptor-mediated cellular uptake ofnanoparticles: a switchable delivery system. Small 2011, 7 (11), 1538−41.)。肿瘤中高表达的铁蛋白特异性受体可以促进肿瘤的增值。 24个亚基自组装形成中空球状蛋白质笼，内外径分别为8nm和12nm，可以包裹小分药物、金属离子、甚至纳米粒子(ZbynekHeger et al. Apoferritin applications in nanomedicineNanomedicine (Lond.)(2014) 9(14), 2233–2245)；而且铁蛋白本身可以在体内分解，无毒无免疫原性。因此，天然铁蛋白是很有应用前景的靶向性药物输送载体。

由于在包裹药物后蛋白质笼的结构几乎没有受到影响，所以很好地保持了去铁铁蛋白的天然活性，保证纳米粒子能够和肿瘤细胞表面的铁蛋白受体特异性结合并被内吞。利用去铁铁蛋白本身可以形成中空笼状结构的特点，可以将苯并噻唑化合物包裹到去铁铁蛋白内，利用去铁铁蛋白与其受体的特异性结合介导药物－去铁铁蛋白复合物纳米粒子的内吞作用，达到对肿瘤细胞靶向性输送药物的效果。

苯并噻唑化合物为一序列具有在体内外选择和有效的抗肿瘤活性化合物。这类化合物选择性对乳腺癌、卵巢癌、肾癌、肺癌和结肠癌有效。而对正常的乳腺细胞和肺成纤维细胞及前列腺癌和黑色素瘤无效。此类化合物具有独特的抗肿瘤作用机制，是亲脂性的化合物，可通过细胞膜，其为芳香烃受体(Aryl Hydrocarbon receptor, AhR)的有效配体,能与细胞质中的芳香烃受体(AhR)结合，结合后可AhR可从细胞质转入细胞核，并与AhR核转运体(AhR nuclear transporter, ARNT; HIF-1β)形成二聚体，活化的AhR/ARNT转录因子可结合到AhR启动子区的外源性反应元件，导致CYP450酶(包括异构体CYP1A1 )的转录。CYP1A1蛋白可代谢活化的苯并噻唑化合物，从而产生亲电离子烷化DNA，导致DNA单链和双链的断裂而导致肿瘤细胞的死亡。由于此类化合物的药理特性，导致其有一定的毒副作用，因此，靶向给药可以将化合物运输到肿瘤细胞而减少毒副作用。由于肿瘤细胞表面高表达铁蛋白受体，因此去铁铁蛋白包裹化合物可以达到对肿瘤细胞靶向性输送药物的效果。

发明内容

本发明的目的在于针对苯并噻唑化合物易产生毒副作用，提供一种以去铁铁蛋白为载体的去铁铁蛋白-苯并噻唑化合物复合物的制备方法，该方法将铁蛋白液体装入透析袋中，透析袋置于含巯基乙酸的pH4.5～5.5醋酸钠透析缓冲液中进行透析，透析过程中持续通入氮气保持无氧环境，每20～25min更换一次，直至透析袋中的液体呈无色，袋中液体用0.22μm过滤器无菌过滤后，制得去铁蛋白母液，BCA法测定母液蛋白浓度；将去铁铁蛋白和苯并噻唑化合物通过原位生产法，使苯并噻唑化合物装载至去铁铁蛋白中，获得去铁铁蛋白-苯并噻唑化合物复合物。